阿司匹林對人食管鱗癌細胞（ECa-109）增殖及轉移的影響.pdf

1、研究背景和目的： 食管癌是嚴重危害人類健康的消化道腫瘤，我國是食管癌高發(fā)區(qū)，居世界首位，食管鱗狀細胞癌(esophageal squamous cellcarcinoma，ESCC)占全部食管癌的95﹪左右。淋巴道轉移是食管癌轉移的主要途徑<'[1]>。 目前環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)和血管內皮生長因子-c(VEGF-c)在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用已經(jīng)成為研究熱點。 環(huán)氧化

2、酶(cyclooxygenase，COX)是前列腺素(PGs)合成初始步驟中的關鍵限速酶。研究表明，COX-2與腫瘤細胞生長、細胞凋亡、腫瘤血管生成與轉移等有密切關系<'[4-5]>。在消化、呼吸等系統(tǒng)發(fā)生的多種惡性腫瘤組織中，COX-2mRNA及其蛋白表達水平均有顯著上調并且與腫瘤的增殖轉移有關<'[6-8]>。Tadahiro等<'[2]>在一組 ESCC 的研究中發(fā)現(xiàn)，COX-2強表達的ESCC患者預后較COX-2弱表達的患者差，

3、在多因素分析中，COX-2是預后差的獨立危險因素。 血管內皮生長因子-c(VEGF-c)是VEGF家族的成員之一，又稱為淋巴管生長因子，是目前發(fā)現(xiàn)的唯一特異的促淋巴管內皮生長因子，可誘導實體瘤內或瘤周的淋巴管生成，與惡性腫瘤的淋巴轉移密切相關<'[12-13]>。Kirkpat rick等<'[10]>發(fā)現(xiàn)PGs可以誘導血管內皮生長因子(VEGF)的表達，使其mRNA水平明顯增高，促進腫瘤微血管生成。流行病學及實驗研究資料表明，

4、長期堅持服用非甾體類抗炎藥(NSAIDs)如阿司匹林等可減少和預防食管癌、胃癌、結腸癌的發(fā)生<'[21]>，使大腸癌的危險性降低40﹪-50﹪<'[22]>。NSAIDs共同的作用機制是抑制花生四烯酸(ArachidonicAcid，AA)代謝過程中的環(huán)氧化酶(Cyclooxygenase，COX)，從而減少前列腺素(Prostaglandins，PGs)的生成。COX-2作為NSAIDs的作用靶點發(fā)揮其抗腫瘤作用。 綜上所述，

5、阿司匹林是否通過對還氧化酶-2(COX-2)活性的影響、下調血管內皮生長因子-c(VEGF-c)的表達對人食管鱗癌細胞(ECa-109)增殖和轉移具有抑制作用是本課題研究目的之所在。 方法： 1、應用四氮唑藍比色法(MTT法)測定阿司匹林對人食管鱗癌細胞(ECa-109)增殖的抑制作用，同時觀察是否存在劑量和時間依賴性。 2、通過流式細胞儀分析細胞周期，觀察阿司匹林對人食管鱗癌細胞(ECa-109)細胞周期的影響

6、。 3、應用半定量逆轉錄一聚合酶鏈反應(RT-PCR)法研究阿司匹林對人食管鱗癌細胞(ECa-109)COX-2mRNA、VEGFmRNA表達的影響。 4、應用Western-Blot法研究阿司匹林對人食管鱗癌細胞(ECa-109)COX-2、VEGF-c表達的影響。 結果: 1、在100μg/ml濃度時阿司匹林作用ECa-109細胞48h、72h有抑制細胞增殖的作用，最佳作用時間為48h；在200μg/

7、ml濃度時阿司匹林作用ECa-109細胞最佳抑制時間為48-72h；在400μg/ml濃度時阿司匹林作用ECa-109細胞最佳抑制時間為72h。 2、阿司匹林(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)作用細胞48h，有顯著上調ECa-109細胞周期中G<,0>/G<,1>期細胞數(shù)目，下調S期細胞數(shù)目的作用(p<0.05)。 3、對照組及阿司匹林(100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml)處理組C

8、OX-2、VEGF基因及蛋白均出現(xiàn)表達，且量效呈現(xiàn)顯著的正相關性。 結論: 1、在100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml濃度范圍內阿司匹林對人食管鱗癌細胞(ECa-109)的增殖有一定的抑制作用，具有劑量和時間依賴性。 2、在100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml濃度范圍內，作用于食管鱗癌細胞(ECa-109)96h，阿司匹林無誘導食管鱗癌細胞凋亡的作用，提示其僅僅可延緩人食管鱗癌細胞

9、(ECa-109)的增殖速度。 3、阿司匹林抑制人食管鱗癌細胞(ECa-109)的增殖，使食管鱗癌細胞(ECa-109)阻滯于G<,0>/G<,1>期，提示阿司匹林抑制人食管癌細胞(ECa-109)的增殖的作用不僅僅與COX-2有關，可能還有其它的抗腫瘤機制。 4、阿司匹林對食管鱗癌細胞(ECa-109)COX-2mRNA、COX-2蛋白的表達有顯著的抑制作用，提示COX-2是其發(fā)揮抗腫瘤作用的重要靶點。 5、阿

10、司匹林對食管鱗癌細胞(ECa-109)VEGFmRNA、VEGF-c蛋白表達有顯著的抑制作用，提示阿司匹林具有抑制ECa-109轉移的作用。 6、阿司匹林抑制ECa-109細胞VEGFmRNA、VEGF-c蛋白表達的機制可能與其下調COX-2mRNA、COX-2蛋白的表達有關，阿司匹林可能通過抑制COX-2的活性，COX-2蛋白表達的下調，進而抑制PGE<,2>下調ECa-109細胞VEGFmRNA的表達，減弱VEGF-c的正反