硼替佐米對(duì)乏氧食管癌細(xì)胞株ECA-109、TE13的放射增敏作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：在我國(guó)食管癌的年發(fā)病率和死亡率分別占第六位和第四位，放療是重要的治療手段,但放射敏感性不高治療效果不理想。此課題研究高效可逆性蛋白酶體抑制劑硼替佐米對(duì)乏氧食管鱗癌細(xì)胞株ECA-109、TE13的放射增敏作用及機(jī)制。
　　方法:以食管鱗癌ECA-109、TE-13細(xì)胞為研究對(duì)象。
　?。?）利用CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)硼替佐米對(duì)ECA-109、TE-13細(xì)胞株增殖能力的影響，選出適宜的藥物濃度；
　?。?）流式細(xì)胞技術(shù)檢

2、測(cè)硼替佐米聯(lián)合照射對(duì)食管癌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響；
　　（3）克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)硼替佐米作用后細(xì)胞的放射敏感性變化；
　　（4）免疫熒光法測(cè)γH2AX灶點(diǎn)來(lái)觀測(cè)DNA雙鏈斷裂（DSB）和DSB修復(fù)能力。
　　（5）Western blot法檢測(cè)硼替佐米作用后食管癌細(xì)胞的HIF-1α和VEGF以及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　（1）硼替佐米對(duì)食管癌ECA-109、TE-13細(xì)胞有生長(zhǎng)抑制作用，隨著

3、硼替佐米濃度或作用時(shí)間的增加，細(xì)胞的抑制率逐漸增大。硼替佐米作用于ECA-109細(xì)胞24h和48h的半抑制濃度IC50分別為36.87nmol／L和20.95nmol／L，硼替佐米作用于TE-13細(xì)胞24h和48h的IC50分別為33.75nmol／L和19.11nmol／L；
　?。?）用含硼替佐米培養(yǎng)基孵育ECA-109、TE-13細(xì)胞24h然后給與照射，兩種細(xì)胞聯(lián)合照射組的凋亡率較單純照射或單純加藥均明顯增加,硼替佐米聯(lián)合照

4、射可使兩種食管癌發(fā)生明顯的G2/M期阻滯；
　?。?）硼替佐米作用于ECA-109、TE-13細(xì)胞24h后，在兩種細(xì)胞中都表現(xiàn)出放療增敏作用，兩種細(xì)胞低藥組和高藥組放療增敏比分別為1.21、1.61和1.42、171；
　?。?）硼替佐米聯(lián)合放療后γH2AX陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)顯著增加；
　?。?）隨著硼替佐米濃度的增加，HIF-1α和VEGF蛋白水平明顯降低；
　　（6）凋亡相關(guān)蛋白Cleaved-Caspase-9