抗表皮生長因子受體單抗對人食管癌TE-13及TE-1細胞株放射增敏作用的體外研究.pdf

1、表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)在人類多種實體瘤組織中過度表達,且其表達異常與腫瘤增殖、分化、血管形成、侵襲轉移、放療抵抗和不良預后密切相關。尼妥珠單抗(nimotuzumab, h-R3)及西妥昔單抗(cetuximab, C225)是抗EGFR IgG型單克隆抗體(monoclonal antibody, mAb),可特異性結合EGFR,阻斷EGFR及其介導的下游信號傳

2、導途徑,從而發(fā)揮抗腫瘤及放療增敏作用。目前這兩種單抗對食管癌放射增敏作用是否存在差異以及食管癌EGFR表達水平是否影響單抗的放射增敏作用尚未可知。
　　研究目的:
　　本實驗旨在對比研究尼妥珠單抗、西妥昔單抗對 EGFR不同表達水平的食管癌細胞株的放射增敏作用,以期為臨床治療提供實驗依據(jù)。
　　研究方法:
　　1.采用流式細胞術(flow cytometry, FCM))測定食管癌細胞表面EGFR表達情況。

3、>　　2.采用聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)和基因測序技術(PCR-DNA)篩選K-ras野生型人食管癌細胞株。
　　3.采用MTS法觀察處理組對食管癌細胞增殖的影響,并計算細胞增殖率。
　　4.通過流式細胞術分析細胞凋亡的變化。
　　5.采用克隆形成實驗檢測 h-R3、C225對食管癌細胞株放射敏感性的影響,多靶單擊模型擬合細胞存活曲線。
　　6.采用免疫印跡(We

4、stern blot)技術檢測EGFR信號通路蛋白的激活。
　　研究結果:
　　1.流式細胞術及PCR-DNA測序法檢測結果顯示食管癌細胞株TE-13 EGFR高表達,TE-1 EGFR低表達,TE-13、TE-1細胞株K-ras基因均為野生型。
　　2. MTS及細胞凋亡實驗結果顯示與無藥對照組相比,單純照射組及照射聯(lián)合單抗組TE-1細胞增殖率明顯減低,細胞凋亡率明顯升高,而h-R3組、C225組TE-1細胞增殖率及

5、凋亡率未見明顯變化。與單純照射組相比,照射聯(lián)合單抗組TE-1細胞增殖率及凋亡率未見明顯變化。與無藥對照組相比,h-R3組、C225組、單純照射組、照射聯(lián)合單抗組 TE-13細胞增殖率均明顯減低,細胞凋亡率均明顯升高。與單純照射組相比,照射聯(lián)合單抗組 TE-13細胞增殖率明顯降低,細胞凋亡率明顯升高,照射聯(lián)合C225組TE-13細胞凋亡率高于照射聯(lián)合h-R3組。
　　3.克隆形成實驗結果顯示h-R3、C225均增強了TE-13細胞的

6、放射敏感性, C225的這種作用略優(yōu)于h-R3。這兩種單抗均未能增強TE-1細胞的放射敏感性。
　　4.免疫印跡結果顯示照射可誘導TE-13及TE-1細胞EGFR信號通路蛋白的激活。h-R3及C225均可阻滯照射誘導的TE-13細胞(EGFR高表達) EGFR信號通路蛋白的激活,C225的這種阻滯作用略優(yōu)于h-R3。這兩種單抗均未能阻滯照射誘導的TE-1細胞(EGFR低表達) EGFR信號通路蛋白的激活。
　　研究結論: