SUD對人食管鱗狀細胞癌細胞株Te-1增殖和凋亡的影響及其機制研究.pdf

1、近年來食管癌的死亡率逐漸增高，在世界惡性腫瘤死亡率中也位居前列，而我國正是食管癌的高發(fā)地區(qū)。目前惡性腫瘤的治療方法有手術、放療、化學治療和免疫治療等手段，以化學治療為主的綜合治療在其中占有十分重要的地位。本實驗選取人食管鱗狀細胞癌細胞株TE-1作為研究對象來考察全合成的新型小分子化合物N-[4-（4，6二甲基-2-嘧啶氧基）-3-甲基苯基]-N-[2-（二甲氨基）]苯甲酰脲(SUD)在細胞生長、細胞周期和凋亡方面的作用，并對其凋亡相關蛋

2、白進行了研究。實驗共分為兩部分:
　　 第一部分:SUD對人食管鱗狀細胞癌細胞株TE-1生長的抑制作用
　　 目的:研究SUD對食管細胞癌細胞TE-1生長的抑制作用。
　　 方法:此部分實驗中采用MTT比色法、生長曲線實驗、平板克隆形成實驗檢測SUD對食管細胞癌細胞TE-1生長的影響。采用光學顯微鏡觀察TE-1細胞的細胞形態(tài)。
　　 結果:(1)MTT實驗顯示SUD具有抑制腫瘤細[1]胞的生長的能力，且這

3、種作用呈時間依賴性與濃度依賴性。SUD10-4mol/L濃度組與陽性對照藥比較具有更強的抑制作用(P＜0.01)。(2)生長曲線實驗結果顯示，SUD能對腫瘤細胞的生長起到抑制作用。(3)平板克隆實驗結果顯示14天后TE-1細胞有18.00％的克隆形成率，SUD10-4mol/L，10-5mol/L和10-6mol/L藥物處理組克隆形成率分別降至0.38％，5.00％和7.22％，與對照組比較具有極顯著性差異(P＜0.01)。(4)普通光

4、鏡下觀察到SUD處理組TE-1細胞都出現(xiàn)了細胞間連接的消失和膜不對稱性，以及細胞皺縮等現(xiàn)象。
　　 結論:(1)SUD可以對細胞產生時間依賴和濃度依賴性抑制，高濃度組與陽性對照藥比較具有顯著性差異。(2)SUD對TE-1細胞克隆形成可產生抑制作用。(3)SUD能引起TE-1形態(tài)的改變。
　　 第二部分:SUD對人食管鱗狀細胞癌細胞株TE-1細胞周期和凋亡的影響
　　 目的:研究SUD對TE-1細胞周期和細胞凋亡的

5、影響及相關機制。
　　 方法:采用流式細胞術對TE-1的細胞周期和凋亡進行分析。采用DAP(I)染色的方法對藥物誘導TE-1凋亡現(xiàn)象進行觀察。使用AnnexinV-PI雙染流式分析術對細胞的早期凋亡進行分析。westernblot檢測凋亡相關蛋白對SUD的凋亡機制進行研究。
　　 結果:(1)SUD10-4mol/L引起TE-1細胞的S期數(shù)量增多與相應的G1期細胞數(shù)量減少。SUD10-5mol/L和10-6mol/L藥物

6、處理組TE-1細胞的G1期數(shù)量增多，S期數(shù)量的減少。10-6mol/L藥物處理組G2/M細胞數(shù)量增多。SUD可引起TE-1細胞的凋亡，與對照組相比具有顯著性差異(P＜0.01)。(2)采用DAPI染色方法可以看到細胞的核固縮，染色質凝集等現(xiàn)象，并可觀測到凋亡小體。給藥作用48h后，與對照組相比中高濃度組光鏡下可以觀察到更多凋亡小體和典型的形態(tài)學變化。(3)對TE-1細胞加藥處理48h后，高、中、低濃度SUD分別誘發(fā)了0.348±0.01

7、3，0.188±0.006和0.084±0.005的早期凋亡，均顯著高于對照組(P＜0.01)。(4)SUD可以誘導凋亡抑制蛋白Bcl-2表達水平的明顯下調，可引起凋亡促進蛋白Bax和p53的表達水平的上調。隨著濃度的升高的凋亡促進蛋白與凋亡抑制蛋白的比值(Bax/Bcl-2)增加。藥物作用48h后細胞中caspase-3、caspase-9和PARP的表達量減少，相應活化的cleavedcaspase-3、cleavedcaspase

8、-9和cleavedPARP片段的表達上調。
　　 結論:(1)SUD10-4mol/L組使TE-1的S期的細胞增多，SUD10-5mol/L和(10-6)mol/L組使TE-1的G1期細胞增多，10-6mol/L組使G2/M期細胞增多。我們初步推測可能是SUD在低濃度時首先抑制細胞暫不增殖進入G1期后不立即轉入S期。(2)SUD可以誘導腫瘤細胞TE-1發(fā)生不同程度的凋亡。(3)SUD對腫瘤細胞TE-1凋亡作用機制可能是通過上調