凋亡抑制蛋白PED-PEa-15在食管鱗狀細(xì)胞癌和不同食管癌細(xì)胞株中的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的:食管癌是一種常見消化道惡性腫瘤，發(fā)病率高、預(yù)后差。目前認(rèn)為食管癌的發(fā)生和發(fā)展與多種因素密切相關(guān)，包括飲食、環(huán)境、遺傳、以及基因改變等。在病因研究中，關(guān)于基因在食管癌發(fā)生過程中的作用成為目前的熱點(diǎn)。食管癌是食管上皮細(xì)胞發(fā)生增殖性病變的過程。該過程中，多種調(diào)節(jié)因子參與細(xì)胞周期中不同環(huán)節(jié)的調(diào)節(jié)，其中細(xì)胞凋亡紊亂為重要的環(huán)節(jié)。細(xì)胞凋亡（apoptosis）是指細(xì)胞的程序性死亡(programmedcelldeath，PCD)，是一個由基因

2、控制的高度有序并有一系列酶參與的主動過程。細(xì)胞凋亡的調(diào)控是在多重因素共同作用下引起促進(jìn)或抑制發(fā)生的復(fù)雜過程。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspases)的活化是凋亡的起始和執(zhí)行階段的主要調(diào)控因素。
　　 目前研究顯示當(dāng)?shù)蛲鰡诱T導(dǎo)因素對Caspase產(chǎn)生作用并且一定基因?qū)ζ溥M(jìn)行調(diào)節(jié)時，細(xì)胞膜上的某些特定受體蛋白就會將凋亡的信號傳遞至Caspase，從而使Caspase發(fā)生級聯(lián)式激活，導(dǎo)致細(xì)胞的形態(tài)學(xué)發(fā)生改變從而發(fā)生細(xì)胞凋亡。

3、>　　 凋亡蛋白抑制因子（inhibitorsofapoptosisprotein，IAPs）是一類在結(jié)構(gòu)上具有同源性的抗凋亡蛋白，此類抗凋亡蛋白在多種惡性腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)。PED/PEA-15與IAPs的抗凋亡機(jī)制相似，是另一種新近發(fā)現(xiàn)的具有廣譜抗凋亡功能的小分子蛋白，兩者均通過抑制Caspase的級聯(lián)激活而阻斷凋亡通路。PED/PEA-15可依靠分子中的“死亡效應(yīng)區(qū)（deatheffectordomain，DED）”抑制“死亡

4、誘導(dǎo)信號復(fù)合體(DISC)”的形成阻斷Caspase級聯(lián)式激活，使腫瘤細(xì)胞的凋亡受到抑制，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。目前對于PED/PEA-15在喉癌、肺癌中的表達(dá)已經(jīng)有相關(guān)研究，但是尚未見其在食管癌中的表達(dá)及其意義的研究。
　　 本實驗通過免疫組織化學(xué)方法檢測PED/PEA-15蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中與食管正常組織中表達(dá)率的差異，分析其與食管癌臨床病理特征的關(guān)系，并探討其表達(dá)與食管癌預(yù)后的關(guān)系。通過RT-PCR方法檢測PED

5、/PEA-15在不同食管癌細(xì)胞株中的表達(dá)差異性。為研究PED/PEA-15是否可作為食管癌靶向治療的新靶點(diǎn)提供理論參考。
　　 方法:
　　 收集2005年1月至12月河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院經(jīng)手術(shù)病理證實的食管鱗狀細(xì)胞癌患者50例，取其癌組織蠟塊。男性32例，女性18例，男女比例1.78/1，患者平均年齡55.9歲。根據(jù)術(shù)后病理結(jié)果侵及粘膜及粘膜下層者9例，侵及肌層者12例，侵及纖維膜者29例，無侵及周圍軟組織病例。術(shù)后病

6、理結(jié)果顯示有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移15例。腫瘤組織低分化者12例，中分化者30例，高分化者8例，將以上癌組織病例定為實驗組，所有病例術(shù)前均未行放化療，術(shù)后隨訪資料完整。收集2005年1月至12月手術(shù)中所取的食管正常組織蠟塊54例，將以上正常組織病例定為對照組。用免疫組織化學(xué)方法檢測50例癌組織及54例食管正常組織中PED/PEA-15的表達(dá)情況，分析其與食管癌臨床病理特征的關(guān)系。
　　 采用由日本千葉縣腫瘤研究中心實驗室

7、友情提供的食管癌細(xì)胞株TE1、TE2。將細(xì)胞株經(jīng)過細(xì)胞復(fù)蘇、傳代等步驟進(jìn)行擴(kuò)增，然后將TE1、TE2兩種癌細(xì)胞分別分為10個備份，分別提取其RNA。通過RT-PCR方法檢測兩種癌細(xì)胞中PED/PEA-15表達(dá)的差異性。
　　 結(jié)果:
　　 1.通過免疫組織化學(xué)方法檢測凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在食管癌組織中的表達(dá)。
　　 凋亡抑制蛋白PED/PEA-15在50例食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的陽性表達(dá)率為60.0％;

8、54例食管正常組織中的陽性表達(dá)率為33.3％。統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示P=0.000(P＜0.05)，兩者的表達(dá)有明顯差異。
　　 PED/PEA-15在50例食管鱗狀細(xì)胞癌組織中有30例陽性表達(dá)，其總陽性表達(dá)率為60.0％。其分布為:男性63.3％，女性36.7％;年齡大于60歲的患者36.7％，小于60歲的患者63.3％;腫瘤位于食管上段者16.7％，中段者63.3％，下段者20.0％。統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示:此蛋白在食管癌組織中的表

9、達(dá)與性別、年齡、腫瘤位置均無相關(guān)性（均P＞0.05）?；颊唛L期生存率分析顯示:PED/PEA-15陽性表達(dá)率越高，患者的五年生存率越低。在30例呈陽性表達(dá)的患者中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者83.3％，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的者16.7％;腫瘤組織侵及粘膜及粘膜下層者10.0％，侵及肌層者23.3％，侵及纖維膜者66.7％;低分化者33.3％，中分化者56.7％，高分化者10.0％。統(tǒng)計學(xué)分析發(fā)現(xiàn)PED/PEA-15的表達(dá)與腫瘤組織的浸潤深度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及

10、分化程度均有密切關(guān)系（均P＜0.05）
　　 2.通過RT-PCR方法檢測PED/PEA-15在食管癌細(xì)胞TE1、TE2中表達(dá)的差異性。
　　 凋亡抑制蛋白PED/PEA-15的mRNA在食管癌細(xì)胞TE1、TE2中表達(dá)的結(jié)果為:TE1(1.513±0.118)、TE2（1.491±0.064）。該mRNA在兩種不同癌細(xì)胞中的表達(dá)無明顯差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.PED/PEA-15在食

11、管鱗狀細(xì)胞癌組織的中的表達(dá)率明顯高于正常組織(P＜0.05)。
　　 2.PED/PEA-15在食管癌組織中的表達(dá)與性別、年齡、腫瘤位置均無相關(guān)性（均P＞0.05）。
　　 3.PED/PEA-15在食管癌組織中的表達(dá)與腫瘤組織的浸潤深度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度均有密切關(guān)系（均P＜0.05）。并且其陽性率越高，患者五年生存率越低。
　　 4.PED/PEA-15在不同的食管癌細(xì)胞株中均有表達(dá)，但表達(dá)無明顯差異（