食管鱗狀細(xì)胞癌中l(wèi)ncRNA的表達(dá)及意義.pdf

1、背景食管癌(esophageal cancer，EC)是一種高度惡性的消化道腫瘤，其發(fā)病率居所有惡性腫瘤的第8位。雖然目前食管癌的治療方法得到優(yōu)化，但5年生存率仍只有10-20％。研究發(fā)現(xiàn)食管癌的發(fā)生、發(fā)展是由多因素作用、多基因變化先后積累的結(jié)果，但其具體的發(fā)病機(jī)制仍不完全明確。因此更好的闡明EC的生物學(xué)行為，了解其發(fā)病機(jī)制對發(fā)展高效、特異性強(qiáng)的診斷方法和治療策略及提高EC術(shù)后生存率具有重要意義。
　　長鏈非編碼RNA(long

2、noncoding RNA，lncRNA)是一類長度超過200個核苷酸而無蛋白質(zhì)編碼功能的RNA分子，進(jìn)化上高度保守，可以通過多種途徑調(diào)控基因的表達(dá)，在機(jī)體生長發(fā)育、細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、激素分泌和腫瘤形成等多個環(huán)節(jié)起著重要的作用。越來越多研究證明，lncRNA的表達(dá)及功能異常與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，在腫瘤發(fā)生過程中類似癌基因或抑癌基因的作用。
　　目的：查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)與食管癌發(fā)生、發(fā)展等病理生理過程相關(guān)的lncRNA的研

3、究目前較少。因此，本課題擬通過高通量基因芯片檢測食管鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)中l(wèi)ncRNA表達(dá)譜，進(jìn)一步篩選并驗證食管鱗癌中相關(guān)的特異性lncRNAs，從而確定食管鱗狀細(xì)胞癌的靶基因，為后期實驗揭示lncRNA在食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制奠定基礎(chǔ)，同時為食管癌早期診斷、預(yù)后判斷及新的治療策略提供思路。
　　方法：利用Human LncRNA Array v3.0生物芯片檢

4、測并比較5對食管鱗癌及癌旁正常組織標(biāo)本的lncRNA表達(dá)譜，篩選出ESCC中異常表達(dá)的lncRNAs;通過分析比較并結(jié)合文獻(xiàn)報道，從45個候選lncRNAs中選定12個進(jìn)行初步分析，運用qRT-PCR方法在5對相同的ESCC及癌旁組織標(biāo)本中初步驗證了HOXA11-AS、LINC00467、GAS5、SACS-AS1等4個異常表達(dá)的lncRNAs;最后在42對ESCC及癌旁組織標(biāo)本中進(jìn)一步驗證上述4個異常表達(dá)的lncRNAs的表達(dá)水平，確

5、認(rèn)與ESCC組織相關(guān)特異的lncRNAs;同時分析基因與食管鱗癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：芯片研究結(jié)果提示食管鱗癌組織與癌旁正常組織相比表達(dá)上調(diào)的lncRNAs有1607個而表達(dá)下調(diào)的有2099個。經(jīng)5對樣本qRT-PCR驗證及結(jié)合文獻(xiàn)分析，找到4個具有研究價值的異常表達(dá)的lncRNAs，結(jié)果發(fā)現(xiàn)lncRNAs LINC00467和HOXA11-AS、GAS5在食管鱗癌中表達(dá)水平增高，而SACS-AS1在食管鱗癌中的

6、表達(dá)水平下降。而我們的42對樣本qRT-PCR驗證數(shù)據(jù)表明高表達(dá)的lncRNA HOXA11-AS在食管鱗癌組織中的表達(dá)陽性率高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;而低表達(dá)的SACS-AS1在食管鱗癌組織中的表達(dá)陽性率高于癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，驗證結(jié)果與基因芯片的結(jié)果相符。同時其相對表達(dá)水平與食管鱗狀細(xì)胞癌的臨床分期、腫瘤的部位、腫瘤細(xì)胞分化程度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），而與患者的年齡

7、、性別無關(guān)（P＞0.05）。
　　結(jié)論：我們首次發(fā)現(xiàn)與癌旁正常組織相比，lncRNA HOXA11-AS在食管鱗癌中的表達(dá)水平升高，而SACS-AS1的表達(dá)水平下降，與基因芯片結(jié)果基本一致;同時其相對表達(dá)水平與食管鱗癌的臨床分期、腫瘤部位、腫瘤細(xì)胞分化程度及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與患者的年齡、性別無關(guān)。因此lncRNA HOXA11-AS和SACS-AS1異常表達(dá)可能與食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，預(yù)示這兩種基因可能是食管鱗癌新的治療靶