SATB2在食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞與組織中的表達(dá)及其意義.pdf

1、目的：食管鱗狀細(xì)胞癌是食管惡性腫瘤中最常見的組織學(xué)類型，由于早期癥狀多不明顯，導(dǎo)致食管癌的早期發(fā)現(xiàn)率較低，確診時(shí)大多數(shù)患者已進(jìn)入臨床中晚期，手術(shù)治療受限，預(yù)后較差。這迫使臨床醫(yī)師和科研工作者不斷尋找食管癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因改變，進(jìn)一步闡明食管癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，從根本上攻克食管癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。特異 AT序列結(jié)合蛋白2(Special AT-rich sequence binding protein2，SATB2)是近年

2、來新發(fā)現(xiàn)的與核基質(zhì)結(jié)合區(qū)結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子，位于人類2號(hào)染色體2q33區(qū)，全長733個(gè)氨基酸，包括一個(gè)同源結(jié)構(gòu)域（氨基酸序列614-677）、一個(gè)具有二聚體化功能的Pfam-B-10016結(jié)構(gòu)域（57-231）、兩個(gè)CUT結(jié)構(gòu)域（352-437和482-560）。研究表明，SATB2參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及中樞神經(jīng)系統(tǒng)和骨骼系統(tǒng)的發(fā)育過程，具有調(diào)控基因表達(dá)和修飾染色體等功能。SATB2基因在乳腺癌、淋巴瘤、頭頸部惡性腫瘤中高表達(dá)，腫瘤病理分

3、級越高，SATB2基因的表達(dá)水平越高，預(yù)后愈差。但是，SATB2在食管癌中的作用及其機(jī)制尚不清楚。本課題擬探討SATB2在食管癌發(fā)生、增殖、預(yù)后、遷移和侵襲中的作用及其可能機(jī)制，為食管癌的基因干預(yù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：⑴利用定量PCR與Western Blot方法檢測食管癌標(biāo)本及癌旁組織中SATB2表達(dá)情況，用免疫組化分析SATB2在203例食管癌石蠟標(biāo)本中的表達(dá)，并分析其與性別、病理類型、年齡、臨床TNM分期、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移

4、及預(yù)后的相關(guān)性。⑵利用慢病毒將pcDNA3.1空載體、pcDNA3.1-SATB2真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染食管癌 EC109細(xì)胞，采用G418篩選穩(wěn)定表達(dá) SATB2和pcDNA3.1的食管癌EC109穩(wěn)定細(xì)胞株。分別采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測SATB2對EC109細(xì)胞增殖能力的影響；劃痕實(shí)驗(yàn)檢測SATB2對EC109細(xì)胞遷移能力的影響；Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)檢測 SATB2對 EC109細(xì)胞侵襲能力的影響；流式細(xì)胞儀檢測SATB2對EC109細(xì)胞周

5、期的影響。⑶采用western blot檢測未處理組、空載體 pcDNA3.1組和pcDNA3.1-SATB2轉(zhuǎn)染組三組細(xì)胞中MMP2、MMP9及AKT/mTor、ERK、P38、STAT3通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，初步探討SATB2對EC109細(xì)胞侵襲、遷移影響的機(jī)制。
　　結(jié)果：①免疫組織化學(xué)結(jié)果表明，在203例食管癌組織中103例（50.7％）表達(dá)水平降低。統(tǒng)計(jì)分析證實(shí) SATB2的表達(dá)水平與臨床分期(P<0.05)、組織分化(P

6、<0.05)呈負(fù)相關(guān)；與病人總生存率與無疾病生存期呈正相關(guān)(P<0.05)。多因素分析提示SATB2的表達(dá)水平可以作為獨(dú)立的預(yù)后分析因素。②利用逆轉(zhuǎn)錄病毒方法建立穩(wěn)定表達(dá)SATB2的食管癌細(xì)胞株，RT-PCR及Western Blot方法證明了SATB2在細(xì)胞中的穩(wěn)定表達(dá)。采用MTT法檢測 SATB2對EC109增殖能力的影響，結(jié)果顯示過表達(dá)SATB2食管癌EC109細(xì)胞的增殖速度明顯降低，與未處理組和空載體pcDNA3.1組相比，具有

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。MTT法結(jié)果顯示：在食管癌EC109細(xì)胞中，SATB2能夠抑制食管癌細(xì)胞增殖；劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：SATB2能夠抑制食管癌細(xì)胞的遷移；Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：SATB2能夠降低EC109細(xì)胞的侵襲能力。③采用Western Blot檢測三組細(xì)胞中MMP2、MMP9及AKT/mTor、ERK、P38、STAT3通路蛋白水平的表達(dá)，結(jié)果顯示，MMP2、MMP9表達(dá)水平及p-Akt、p-mTor磷酸化水平減低

8、。表明SATB2可能通過調(diào)節(jié)Akt/mTor通路調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。
　　結(jié)論：⑴SATB2在食管癌細(xì)胞和大部分食管癌組織中低表達(dá)，其表達(dá)水平與食管癌的惡性程度呈負(fù)相關(guān)，可作為評價(jià)食管癌病人預(yù)后的潛在分子標(biāo)記物；⑵成功構(gòu)建SATB2穩(wěn)定過表達(dá)的EC109，經(jīng)MTT實(shí)驗(yàn)、劃痕實(shí)驗(yàn)、Matrigel侵襲實(shí)驗(yàn)證實(shí)：SATB2能夠抑制食管癌EC109細(xì)胞增殖、遷移和侵襲。⑶食管癌EC109細(xì)胞中過表達(dá)SATB2，能夠降低Akt/mT