食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株MT-3基因CpG島超甲基化的意義.pdf

1、食管癌是我國高發(fā)的惡性腫瘤。其發(fā)生是多種癌基因的激活與抑癌基因的失活長期協(xié)同作用的結(jié)果?；虍惓＜谆悄壳八某蛔?、缺失和移位之外的另一種基因異常改變，與其它基因異常相比，基因的甲基化研究不僅對(duì)惡性腫瘤的病因、早期診斷及預(yù)后評(píng)價(jià)有很大價(jià)值，而且對(duì)腫瘤的基因治療研究有著重要的作用。目前已知，MT-3基因是細(xì)胞內(nèi)一種金屬硫蛋白的編碼基因，不僅具有許多重要的生理功能，還可以抑制細(xì)胞增殖，已有研究發(fā)現(xiàn)MT-3基因在胃癌中存在異常甲基化。本

2、課題應(yīng)用MSP和RT-PCR方法檢測食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株中的MT-3基因的甲基化情況及其對(duì)MT-3基因mRNA表達(dá)的影響，以揭示MT-3基因甲基化在食管癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。 方法 1 選取五種食管癌細(xì)胞株和正常人血液單核細(xì)胞，其中TE-1，TE-13，TTN和ECA-109為食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株，0E33為食管腺癌細(xì)胞株，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)，對(duì)其mRNA的表達(dá)情況進(jìn)行研究，旨在揭示MT-3基因RNA表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞

3、癌發(fā)生的關(guān)系。 2 選取TE-1，TE-13，1TN，ECA-109和OE33五種食管癌細(xì)胞株，應(yīng)用MSP技術(shù)，對(duì)其MT-3基因CpG島的超甲基化情況進(jìn)行研究，從而了解MT-3基因CpG島的超甲基化狀況與食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生的關(guān)系。 3 應(yīng)用RT-*PCR技術(shù)和MSP技術(shù)對(duì)五種食管癌細(xì)胞株經(jīng)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-氮2'-脫氧胞苷(5-Aza-CdR)處理后進(jìn)行研究，包括MT-3基因CpG島甲基化情況和MT_3基因m

4、RNA表達(dá)量的研究，以闡明MT-3基因CpG島的甲基化和MT-3基因mRNA表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。 結(jié)果 1 MT-3基因mRNA在試驗(yàn)的細(xì)胞中均有不同程度的表達(dá)。其中正常人血液單核細(xì)胞的MT-3表達(dá)量最大，其次為TE13，而OE33沒有表達(dá)。 2 所有實(shí)驗(yàn)的食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株中MT-3基因mRNA的表達(dá)量明顯低于正常人血液單核細(xì)胞的表達(dá)量(P<0.01)。 3 MSP結(jié)果顯示食管鱗

5、狀細(xì)胞癌細(xì)胞株中廣泛存在MT-3基因CpG島的甲基化，其中以TE1最重，沒有非甲基化引物擴(kuò)增產(chǎn)物，處于完全甲基化狀態(tài)。其余三種食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株甲基化程度相對(duì)較弱，為半甲基化狀態(tài)。 4 MSP結(jié)果顯示經(jīng)5-Aza-CdR處理后五種食管癌細(xì)胞株的MT-3基因超甲基化狀態(tài)均發(fā)生了去甲基化改變，最為明顯的是TEl3和OE33，TEl3細(xì)胞株基本上發(fā)生了完全去甲基化，OE33細(xì)胞株也出現(xiàn)了明顯的非甲基化引物擴(kuò)增產(chǎn)物。 5

6、各細(xì)胞株經(jīng)5-Aza-CdR處理后mRNA表達(dá)量較處理前明顯增多(P<0.01)。 結(jié)論 1 食管癌細(xì)胞株中存在不同程度的MT-3蛋白表達(dá)，其中OE33完全沒有發(fā)現(xiàn)MT-3蛋白表達(dá)，其余四種食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株可檢測到多少不等的MT-3蛋白表達(dá)。 2 實(shí)驗(yàn)的所有食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株的MT-3蛋白表達(dá)量明顯低于正常人血液單核細(xì)胞的表達(dá)量，即食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株中存在廣泛的MT-3蛋白表達(dá)水平下降。 3

7、 實(shí)驗(yàn)的所有食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株的MT_3基因CpG島廣泛存在超甲基化。 4 MSP結(jié)果顯示：經(jīng)5-Aza-CdR處理后的四種食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株中的MT-3基因CpG島超甲基化狀態(tài)均發(fā)生了不同程度的去甲基化改變。 5 食管鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株中廣泛存在MT-3基因CpG島的超甲基化，而且這些甲基化可以引起MT-3蛋白表達(dá)水平的下降。經(jīng)5-Aza-CdR處理后，MT-3基因的甲基化狀態(tài)解除，MT-3蛋白的表達(dá)水平也相應(yīng)地