Cx32基因在肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)與甲基化調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、背景：肝癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，研究表明肝癌發(fā)生與遺傳及后天發(fā)生機(jī)制等多種因素有關(guān)，但是其分子機(jī)制仍不是很清楚。迄今為止，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了很多種肝癌相關(guān)基因，連接蛋白(connexinCx)基因就是其中之一。Cx基因家族被認(rèn)為是一種腫瘤抑制基因，已經(jīng)在許多腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)表達(dá)下降，其中包括肝細(xì)胞癌。下調(diào)機(jī)制不是很清楚。 目的：了解在肝癌細(xì)胞株(HepG2株)Cx32基因表達(dá)沉默中的甲基化調(diào)節(jié)作用，以利于恢復(fù)肝細(xì)胞癌Cx的正常表達(dá)，

2、恢復(fù)正常細(xì)胞間隙通訊功能，為肝癌的診斷和治療提供一定的理論依據(jù)。 方法：運(yùn)用甲基化酶抑制劑(5-雜氮脫氧胞苷)，將試驗(yàn)分無5-雜氮脫氧胞苷組、含不同濃度的5-雜氮脫氧胞苷(1uM和5uM組)培養(yǎng)HepG2細(xì)胞株，采用細(xì)胞免疫組化方法分析Cx32的蛋白質(zhì)表達(dá)；采用甲基化特異性PCR技術(shù)檢測(cè)Cx32基因啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)。 結(jié)果：3組細(xì)胞中Cx32蛋白表達(dá)總陽(yáng)性率為18.5％(+17％、++1.5％)、77％(+65.5％、

3、++11.5％)、88％(+58％、++30％)，統(tǒng)計(jì)分析,Cx32表達(dá)增加，且定位異常，差異具有顯著性，去甲基化后細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢，惡性程度下降；甲基化特異性檢測(cè)結(jié)果分別為甲基化、部分及完全去甲基化。 結(jié)論： 1．HepG2中Cx32基因甲基化陽(yáng)性，Cx32基因表達(dá)下調(diào)，提示肝癌存在Cx32基因表達(dá)異常； 2．HepG2中Cx32基因去甲基化后可增加表達(dá)，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制，提示肝癌Cx32基因表達(dá)受到甲基化調(diào)控；