食管癌細胞MT-3基因CpG島超甲基化的意義以及食管癌組織DNA提取方法的優(yōu)化.pdf

1、河北醫(yī)科大學博士學位論文食管癌細胞MT3基因CpG島超甲基化的意義以及食管癌組織DNA提取方法的優(yōu)化姓名：田子強申請學位級別：博士專業(yè)：外科學指導教師：劉俊峰李保慶20040401中文摘要究所提RNA的MT3mRNA的表達情況，然后與各臨床病理參數(shù)進行比較。3取2000年河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院胸外科普通甲醛固定的食管癌標本蠟塊lO例，1984年普通甲醛固定的標本蠟塊10例，2000年澳大利亞皇家阿德雷德醫(yī)院病理科中性緩沖甲醛固定的食管癌標

2、本蠟塊10例，新鮮食管癌組織3例，以蛋白酶K消化NaCl鹽析法分別提取其DNA，進行電泳和PCR擴增分析，研究其DNA的降解情況。4取我院2000年手術切除的甲醛固定石蠟包埋的食管癌標本10例，分別以蛋白酶K消化酚氯仿抽提法，蛋白酶K消化氯化鈉鹽析法和不同pH值下加熱提取法提取DNA，然后進行電泳和PCR擴增分析，以比較不同方法提取DNA的質(zhì)量。5取我院2000年至2001年手術切除的甲醛固定石蠟包埋的食管癌標本15例，在蛋白酶K消化法

3、進行DNA提取的過程中，應用交叉設計對脫蠟方法，消化溫度，消化時間和抽提方法四種參數(shù)進行研究，所得DNA質(zhì)量用電泳分析和PCR擴增結(jié)果判斷，以尋找蛋白酶K消化法自石蠟包埋組織中提取DNA的理想實驗條件。6選取我院2000年5月至2001年8月切除的食管鱗癌標本的石蠟包埋組織47例，應用上述研究所篩選出的蛋白酶K消化氯化鈉鹽析法提取腫瘤、上切緣、下切緣及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的標本蠟塊DNA，經(jīng)重亞硫酸化處理后，應用COBRA分析技術，以限制性內(nèi)切酶

4、BstUI消化研究其甲基化情況，所得結(jié)果與新鮮食管癌手術標本結(jié)果、各臨床病理參數(shù)及隨訪資料進行比較研究，以明確MT3基因甲基化在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用，和普通甲醛固定石蠟包埋組織中提取DNA進行甲基化研究的可行陛。結(jié)果1四種細胞株MT3基因的CpG島均存在不同程度的超甲基化，以OE33甲基化水平最高，OEl9甲基化水平最低。2經(jīng)5azaCdR處理后，四種細胞株中MT3基因的超甲基化狀態(tài)基本解除，其中細胞株OE33和OE21已檢測不出有甲