食管癌細(xì)胞MT-3基因CpG島超甲基化的意義以及食管癌組織DNA提取方法的優(yōu)化.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文食管癌細(xì)胞MT3基因CpG島超甲基化的意義以及食管癌組織DNA提取方法的優(yōu)化姓名：田子強(qiáng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：劉俊峰李保慶20040401中文摘要究所提RNA的MT3mRNA的表達(dá)情況，然后與各臨床病理參數(shù)進(jìn)行比較。3取2000年河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院胸外科普通甲醛固定的食管癌標(biāo)本蠟塊lO例，1984年普通甲醛固定的標(biāo)本蠟塊10例，2000年澳大利亞皇家阿德雷德醫(yī)院病理科中性緩沖甲醛固定的食管癌標(biāo)

2、本蠟塊10例，新鮮食管癌組織3例，以蛋白酶K消化NaCl鹽析法分別提取其DNA，進(jìn)行電泳和PCR擴(kuò)增分析，研究其DNA的降解情況。4取我院2000年手術(shù)切除的甲醛固定石蠟包埋的食管癌標(biāo)本10例，分別以蛋白酶K消化酚氯仿抽提法，蛋白酶K消化氯化鈉鹽析法和不同pH值下加熱提取法提取DNA，然后進(jìn)行電泳和PCR擴(kuò)增分析，以比較不同方法提取DNA的質(zhì)量。5取我院2000年至2001年手術(shù)切除的甲醛固定石蠟包埋的食管癌標(biāo)本15例，在蛋白酶K消化法

3、進(jìn)行DNA提取的過程中，應(yīng)用交叉設(shè)計(jì)對(duì)脫蠟方法，消化溫度，消化時(shí)間和抽提方法四種參數(shù)進(jìn)行研究，所得DNA質(zhì)量用電泳分析和PCR擴(kuò)增結(jié)果判斷，以尋找蛋白酶K消化法自石蠟包埋組織中提取DNA的理想實(shí)驗(yàn)條件。6選取我院2000年5月至2001年8月切除的食管鱗癌標(biāo)本的石蠟包埋組織47例，應(yīng)用上述研究所篩選出的蛋白酶K消化氯化鈉鹽析法提取腫瘤、上切緣、下切緣及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的標(biāo)本蠟塊DNA，經(jīng)重亞硫酸化處理后，應(yīng)用COBRA分析技術(shù)，以限制性內(nèi)切酶

4、BstUI消化研究其甲基化情況，所得結(jié)果與新鮮食管癌手術(shù)標(biāo)本結(jié)果、各臨床病理參數(shù)及隨訪資料進(jìn)行比較研究，以明確MT3基因甲基化在食管癌發(fā)生發(fā)展中的作用，和普通甲醛固定石蠟包埋組織中提取DNA進(jìn)行甲基化研究的可行陛。結(jié)果1四種細(xì)胞株MT3基因的CpG島均存在不同程度的超甲基化，以O(shè)E33甲基化水平最高，OEl9甲基化水平最低。2經(jīng)5azaCdR處理后，四種細(xì)胞株中MT3基因的超甲基化狀態(tài)基本解除，其中細(xì)胞株OE33和OE21已檢測(cè)不出有甲