EEN-B1及其甲基化在外陰鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：
　　研究外陰病變組織及外陰鱗癌細(xì)胞系A(chǔ)-431中EEN-B1基因表達(dá)情況及其甲基化水平，探討該蛋白表達(dá)與該基因甲基化的關(guān)系及兩者在外陰鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法：
　　運(yùn)用免疫組化方法和Westernblot法檢測(cè)外陰病變組織標(biāo)本中EEN-B1蛋白表達(dá)情況，采用重亞硫酸鹽測(cè)序PCR聯(lián)合TA克隆測(cè)序法檢測(cè)外陰鱗癌組織中EEN-B1啟動(dòng)子甲基化情況。將甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-dc作用于A-431細(xì)胞系，運(yùn)

2、用Westernblot及BSP法檢測(cè)處理前后EEN-B1蛋白表達(dá)及基因甲基化水平的變化，采用MTT法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)處理前后A-431細(xì)胞增殖及凋亡情況。
　　結(jié)果：
　　EEN-B1蛋白在外陰鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)陽(yáng)性率為48.08％，在外陰上皮內(nèi)瘤變組織中的陽(yáng)性率為68.08％，在正常外陰組織中表達(dá)陽(yáng)性率為100％。外陰鱗癌、外陰上皮內(nèi)瘤變與正常外陰組織分別比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Westernblot檢

3、測(cè)得到同樣的結(jié)果，在外陰鱗癌、外陰上皮內(nèi)瘤變及正常外陰組織中該蛋白表達(dá)陽(yáng)性率分別為6.67％(1/15)、26.67％(4/15)、100％(15/15)，差異具有顯著性;BSP聯(lián)合TA克隆測(cè)序法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)外陰鱗癌組織中EEN-B1啟動(dòng)子的甲基化率為54.66％，與正常外陰組織的12.16％相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);經(jīng)10-7mol/L5-Aza-dc處理A-431細(xì)胞系72小時(shí)后，EEN-B1啟動(dòng)子的甲基化率由67.05

4、％下降至26.82％(P＜0.05)，而該蛋白表達(dá)明顯上調(diào)。MTT法檢測(cè)5-Aza-dc可抑制A-431細(xì)胞的增殖，隨濃度增大、作用時(shí)間的延長(zhǎng)抑制作用更明顯。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示5-Aza-dc的濃度為10-6mol/L時(shí)，細(xì)胞凋亡率最高。
　　結(jié)論：
　　1、EEN-B1蛋白表達(dá)下降在外陰鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展中起一定作用。
　　2、EEN-B1表達(dá)下降的原因之一可能為其啟動(dòng)子的甲基化。
　　3、5-Aza-dc