EB病毒和p16基因甲基化在子宮頸鱗狀細胞癌和癌前病變中的表達及意義.pdf

1、目的：采用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(Methylation-SpecificPolymerize Chain Reaction，MSPCR)檢測不同子宮頸組織中p16基因甲基化的情況并結(jié)合免疫組化(Immunohistochemistry,IHC)技術(shù)檢測EB病毒(Epstein-Barr Virus，EBV)和p16基因蛋白表達，分析EBV感染與子宮頸鱗狀細胞癌(Cervical Squamous Cell Carcinoma,CSC

2、C)的發(fā)病關(guān)系，探討EBV的可能致癌機制，以期為CSCC的早期診斷和子宮頸上皮內(nèi)瘤變(Cervical Intraepithelial Neoplasia,CIN)惡性潛能的評估提供線索和依據(jù)。 方法： 1．收集瀘州醫(yī)學院附屬醫(yī)院病理科2005年1月～11月存檔的子宮頸病變的石蠟標本和相應(yīng)的臨床病理資料共82例，其中包括CSCC組織29例，CIN組織40例及正常子宮頸鱗狀上皮組織13例。組織病理分級：CIN Ⅰ～Ⅱ級20

3、例，CINⅢ級20例。臨床分期(Clinical Staging，SC)按2002年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(Intemational Federation of Gynecology andObstetrics，F(xiàn)IGO)公布的新分期方法：Ⅰ期14例，Ⅱ、Ⅲ期15例。 2．構(gòu)建組織芯片(Tissue Microarray)結(jié)合鏈霉親和素—過氧化物酶染色法(Streptavidin Peroxydase Method，SP法)檢測正常子宮

4、頸鱗狀上皮組織、CIN、CSCC組織中p16蛋白和EBV的表達情況(切片過程中CINⅢ級和CSCC Ⅱ、Ⅲ期組織各缺失1例，將缺失的病例從實驗組中刪除，實際入選病例為80例)。 3．以MSPCR技術(shù)擴增并鑒定p16基因甲基化的發(fā)生率。 4．實驗結(jié)果應(yīng)用SPSS 12.0 for windows軟件包對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。采用四格表X2檢驗和Fisher's精確概率法檢驗，以P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果：

5、 1．正常子宮頸鱗狀上皮組織、CIN和CSCC組織中，EBV蛋白陽性表達率分別為15.38％(2/13)、51.28％(20/39)、67.86％(19/28)，表達率呈遞增趨勢。其中正常子宮頸鱗狀上皮組織與CIN比較差異有顯著性(x2=5.147，P=0.023<0.05)；正常子宮頸鱗狀上皮與CSCC比較差異有顯著性(x2=9.784，P=0.002<0.05)；CIN組間、CSCC組織學分級及臨床分期之間比較差異無顯著性。

6、 2．正常子宮頸鱗狀上皮組織、CIN和CSCC中，p16蛋白陽性表達率分別為7.69％(1/13)、64.10％(25/39)、78.57％(22/28)，表達率呈遞增趨勢。其中正常子宮頸鱗狀上皮組織與CIN比較差異有顯著性(x2=12.41，P=0.000<0.05)；正常子宮頸鱗狀上皮組織與CSCC比較差異有顯著性(x2=18.11，P=0.000<0.05)；而CIN與CSCC比較差異無顯著性(x2=1.629，P=0.2

7、02>0.05)。CIN Ⅰ～Ⅱ與CINⅢ級陽性表達率分別為45.00％(9/20)和84.21％(16/19)，兩者比較差異有顯著性(x2=6.510，P=0.011<0.05)；CSCC組織學分級及臨床分期之間比較差異無顯著性(P>0.05)。 3．p16-M和p16-U擴增的目標序列長度分別為150bp、151bp，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳(Agarose Gel Electrophoresis，AGE)分離后在DNA mar

8、ker指示的相應(yīng)位置上分別出現(xiàn)p16-M和p16-U兩條明亮、邊緣清晰的單一條帶或只出現(xiàn)p16-M單一條帶為陽性(+)結(jié)果，只有p16-U相應(yīng)位置上出現(xiàn)清晰條帶而p16-M相應(yīng)位置沒有或僅有非特異性條帶者為陰性(-)結(jié)果。正常子宮頸鱗狀上皮組織、CIN和CSCC組織中，p16 MSPCR陽性者分別為0.00％(0/13)、17.95％(7/39)、25.00％(7/28)，表達率呈遞增趨勢。正常子宮頸鱗狀上皮組織與CSCC比較差異有顯著

9、性(x2=3.919，P=0.048<0.05)；CSCC組織學分級與臨床分期之間比較差異無顯著性(P>0.05)。 4．應(yīng)用免疫組化檢測80例子宮頸組織，EBV陽性表達41例，p16蛋白陽性表達48例：應(yīng)用MSPCR方法檢測p16基因甲基化14例陽性。41例EBV陽性表達的子宮頸組織中甲基化p16陽性8例，p16蛋白陽性26例；而EBV陰性39例中甲基化p16陽性6例，p16蛋白陽性22例。應(yīng)用Fisher's精確概率法檢驗p

10、16基因甲基化在EBV陽性和陰性表達的病例中兩組間的差異無顯著性(P=0.771>0.05)，p16蛋白在EBV陽性和陰性表達的病例中兩組間的差異無顯著性(P=0.649>0.05)。 結(jié)論： 1．EBV表達增加隨子宮頸病變惡性程度的增高而增加，與CSCC組織學分級及臨床分期無關(guān)，提示EBV在CSCC的發(fā)生、發(fā)展過程中起一定的作用。 2．EBV在子宮頸鱗狀細胞癌變的過程中可能不是導致p16基因甲基化的原因，p16