TLR7和NF-κB在外陰硬化性苔癬和外陰鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá).pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　 探討TLR7和NF-κB在外陰硬化性苔癬和外陰鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的表達(dá)及作用。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：
　　 一、材料
　　 收集中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦科手術(shù)病人石蠟組織標(biāo)本，分別取外陰的正常皮膚組織12例、外陰硬化性苔癬組織20例、外陰鱗狀細(xì)胞癌組織20例。以上標(biāo)本均已經(jīng)過(guò)病理科出具病理證實(shí)。
　　 二、試劑
　　 兔抗人單克隆抗體TLR7購(gòu)于北京博奧森，兔抗人單

2、克隆抗體NF-κB65購(gòu)于Santa Cruz，兔spkit超敏試劑盒購(gòu)于北京中杉金橋，PBS(Phosphate bufferedsolution，磷酸鹽緩沖液)，DAB(Diaminobenzidine，3，3-二氨基苯聯(lián)胺)，重鉻硫酸，二甲苯，梯度酒精，3％雙氧水，正常非免疫動(dòng)物血清，鏈霉菌抗生物素一過(guò)氧化物酶溶液，生物素標(biāo)記的第二抗體等。
　　 三、免疫組化檢測(cè)
　　 采用免疫組化SP法分別檢測(cè)TLR7和NF-κ

3、B65在外陰硬化性苔鮮組織20例、外陰鱗狀細(xì)胞癌組織20例、取12例外陰正常皮膚組織作對(duì)照。
　　 四、結(jié)果判定
　　 應(yīng)用AX70萬(wàn)能顯微照相系統(tǒng)(OLYMPUS，日本)進(jìn)行圖像采集，TLR7陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞漿，NF-κB陽(yáng)性染色定位于細(xì)胞核、部分細(xì)胞漿，細(xì)胞染色強(qiáng)度分為：陰性(-)為不著色，弱陽(yáng)性(+)為淡黃色，陽(yáng)性(++)為棕黃色，強(qiáng)陽(yáng)性(+++)為深棕黃色。應(yīng)用顯微圖像分析系統(tǒng)Meta Morph(UIC/OL

4、US.US/JP)進(jìn)行積分光密度測(cè)定，每張切片選取5個(gè)不同視野，計(jì)算同一張切片的平均光密度值，其代表陽(yáng)性染色細(xì)胞在該組織中的表達(dá)水平。
　　 五、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 利用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件，各組計(jì)量資料的結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)。P<0.05表示組間有顯著性差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　 TLR7陽(yáng)性細(xì)胞在正常外陰皮膚中全層均有表達(dá)，強(qiáng)度為++～+++，TLR7條帶光密度值為0.2793±0.

5、0946；在外陰硬化性苔癬組織中全層或下1/3層表達(dá)，強(qiáng)度為+～++，TLR7條帶光密度值為0.25379±0.0784；兩者相比有顯著性差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在外陰鱗狀細(xì)胞癌中主要在癌巢表達(dá)，強(qiáng)度為+++，TLR7條帶光密度值為0.27034±0.1391，與外陰正常皮膚相比無(wú)顯著性差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。外陰鱗狀細(xì)胞癌與外陰硬化性苔癬相比有顯著性差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 NF-κB

6、65陽(yáng)性細(xì)胞在正常外陰皮膚表皮中表現(xiàn)為近基底細(xì)胞和基底細(xì)胞陽(yáng)性，強(qiáng)度為+～+++，NF-κB65條帶光密度值為0.27136±0.0526；在外陰硬化性苔癬組織中表現(xiàn)為全層下1/3陽(yáng)性，強(qiáng)度為-～+，NF-κB65條帶光密度值為0.2476±0.0687；兩者相比有顯著性差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。在外陰鱗狀細(xì)胞癌組織中主要在癌巢表達(dá)，強(qiáng)度為++～+++，NF-κB65條帶光密度值為0.327±0.0691，與外陰正常皮膚相比有