TIMP-3在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)及其CpG島的甲基化狀況研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　原發(fā)性肝癌是嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一,復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移是肝癌患者預(yù)后差、死亡率高的主要原因。它的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)多階段的過程,涉及多個(gè)基因的改變。目前缺乏行之有效的早期診斷和防治措施。闡明其分子發(fā)病機(jī)制和致病基因,對(duì)于開發(fā)新的診療措施至關(guān)重要?，F(xiàn)有研究表明,在肝癌的發(fā)生、發(fā)展過程中存在著多種抑癌基因CpG島的異常甲基化現(xiàn)象,干擾抑癌基因的表達(dá),導(dǎo)致細(xì)胞異常增殖,引起起細(xì)胞癌變。
　　本研究通過對(duì)不同肝癌細(xì)胞

2、株中TIMP-3mRNA的表達(dá)及其CpG島甲基化狀態(tài)的檢測(cè),初步分析TIMP-3基因甲基化水平對(duì)mRNA表達(dá)的影響。并使用去甲基化藥物5-雜氮-2’脫氧胞苷對(duì)甲基化陽性的細(xì)胞株進(jìn)行干預(yù),觀察該藥物對(duì)肝癌細(xì)胞株中TIMP-3基因表達(dá)及其CpG島甲基化程度的影響。
　　方法：
　　運(yùn)用熒光定量PCR檢測(cè)12例肝癌癌旁組織及8株肝癌細(xì)胞系中TIMP-3表達(dá)情況。使用MSP定性檢測(cè)8株肝癌細(xì)胞株、25例肝癌組織及23例癌旁組織中TI

3、MP-3CpG島甲基化狀況。使用去甲基化藥物5-雜氮-2’脫氧胞苷對(duì)甲基化陽性的細(xì)胞株進(jìn)行干預(yù),觀察干預(yù)組與對(duì)照組TIMP-3基因表達(dá)差異,并使用焦磷酸測(cè)序技術(shù)定量檢測(cè)CpG島甲基化差異。
　　結(jié)果：
　　研究發(fā)現(xiàn)8株肝癌細(xì)胞中TIMP-3mRNA表達(dá)均顯著低于肝癌旁組織(P<0.01)。而且在8株肝癌細(xì)胞系中有C3A、Hep-3B、HepG23株檢測(cè)到TIMP-3CpG島甲
　　基化陽性,經(jīng)去甲基化藥物干預(yù)后,經(jīng)去甲

4、基化藥物干預(yù)后,在這3株肝癌細(xì)胞中均發(fā)現(xiàn)TIMP-3mRNA的表達(dá)較對(duì)照組有明顯上調(diào)(P<0.05),CpG島的甲基化率下降(P<0.05)。在25例肝癌組織中有9例出現(xiàn)了甲基化(36％),23例癌旁組織中有5例出現(xiàn)了甲基化(21.7%),兩者比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.349)。
　　結(jié)論：
　　TIMP-3啟動(dòng)子區(qū)域CpG島甲基化是其在肝癌細(xì)胞株中表達(dá)降低的原因之一,而且甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑能顯著降低肝癌細(xì)胞株TIMP-3Cp