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1、DNA甲基化狀態(tài)異常參與包括腫瘤在內(nèi)的多種重大疾病的發(fā)生、發(fā)展。腫瘤相關(guān)的DNA甲基化狀態(tài)異常包括全基因組范圍的DNA低甲基化和抑癌基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島的高甲基化。本研究旨在分析SRD5A2基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島區(qū)在12株肝癌細(xì)胞系,其中包括6例正常肝組織以及20例肝癌和癌旁組織中的甲基化情況。雖然,針對(duì)癌癥診斷和預(yù)后的遺傳圖譜(SNP,LOH,突變)和表達(dá)圖譜(mRNA譜和蛋白表達(dá)譜)的生物標(biāo)志已經(jīng)被大規(guī)模的分析,但是運(yùn)用表觀遺傳學(xué)指紋
2、對(duì)腫瘤進(jìn)行早期診斷和臨床預(yù)后分析表現(xiàn)出具有更大的潛力,這種潛力極大得推動(dòng)了 DNA甲基化作為癌癥預(yù)后生物標(biāo)志的研究。人類癌癥生物標(biāo)志的發(fā)現(xiàn)對(duì)于腫瘤亞型精確的分類和預(yù)測(cè)臨床預(yù)后方法的發(fā)展是非常重要的。應(yīng)用甲基化特異性 PCR技術(shù)(Methylation Specific PCR,MSP)研究了基因SRD5A2啟動(dòng)子區(qū)在12種肝癌細(xì)胞系,6例正常對(duì)照,和20例肝癌臨床樣品中的甲基化情況。
MSP甲基化測(cè)序其缺點(diǎn)是要預(yù)先知道待測(cè)片段
3、DNA的序列,需要兩組已知的關(guān)鍵性 CpG位點(diǎn)設(shè)計(jì)上下游引物,并且這些位點(diǎn)必須完全甲基化或完全不甲基化。事實(shí)上,能夠完全滿足這些條件的基因數(shù)目比較少,該方法具有非常明顯的基因“選擇性”。同時(shí)這種只能明確是否存在甲基化;若要求定量,則需用其他的方法再進(jìn)行進(jìn)一步的檢測(cè)。
SRD5A2(steroid-5-alpha-reductase,alphapolypeptide2)基因能夠在對(duì)雄性激素敏感的細(xì)胞如前列腺,肝臟細(xì)胞內(nèi)高水平編碼
4、SRD5A2微粒體蛋白。結(jié)果表明:結(jié)果發(fā)現(xiàn):SRD5A2在12株肝癌細(xì)胞系中,8株呈純合甲基化(SMMC-7721、Hep-3B、Hep-G2、SK-Hep-1、YY-8103、Bel-7404、Bel-7405、QGY-7701),1株呈雜合甲基化(QGY-7703),2株呈純合去甲基化(Focus和PLC)。令人意外的是,6例正常肝組織樣品中有1例呈純合甲基化(N2),余下5例呈現(xiàn)純合去甲基化; Bel-7402的分析失敗。此后對(duì)S
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