肝癌細(xì)胞中OY-TES-1基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)分析.pdf

1、目的:
　　預(yù)測(cè)OY-TES-1基因的啟動(dòng)子區(qū)域，了解肝癌細(xì)胞中OY-TES-1基因啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)及甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑對(duì)肝癌細(xì)胞OY-TES-1基因甲基化的影響。
　　方法:
　　(1)運(yùn)用生物信息學(xué)在線軟件，獲取OY-TES-1基因的5'上游序列，預(yù)測(cè)啟動(dòng)子區(qū)域、轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)和CpG島。
　　(2)提取6種肝癌細(xì)胞株（QGY-7703、BEL-7404、BEL-7402、QGY-7701、SMMC-7721

2、和HepG-2）基因組DNA，應(yīng)用亞硫酸氫鹽測(cè)序法(bisulfite-sequencing PCR，BSP)，分析肝OY-TES-1基因啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)。
　　(3)用2μmol/L甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(5-Aza-CdR)培養(yǎng)BEL-740472小時(shí)，提取基因組DNA，應(yīng)用BSP分析OY-TES-1基因啟動(dòng)子的甲基化狀態(tài)，比較干預(yù)前后OY-TES-1啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)的改變。
　　結(jié)果:
　　(1)生物信息學(xué)分析結(jié)果顯

3、示，OY-TES-1啟動(dòng)子區(qū)域位于-184bp～67bp，含多個(gè)潛在轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)（9個(gè)SP1，4個(gè)GCF和1個(gè)CREB）;OY-TES-1全長(zhǎng)序列存在兩個(gè)CpG島，第一個(gè)CpG島位于-200bp～+126bp，第二個(gè)CpG島位于+137bp～+587bp。
　　(2)根據(jù)BSP結(jié)果計(jì)算OY-TES-1啟動(dòng)子總甲基化頻率，6種肝癌細(xì)胞株的甲基化頻率分別為51.25％(QGY-7701)、62.08％(HepG-2)、76.67％

4、(BEL-7402)、79.58％(SMMC-7721)、87.08％(BEL-7404)和87.92％(QGY-7703)。
　　(3) BEL-7404經(jīng)5-Aza-CdR處理后，OY-TES-1基因啟動(dòng)子的總甲基化頻率由于預(yù)前的87.08％下降至21.25％。
　　結(jié)論:
　　OY-TES-1基因啟動(dòng)子含有CpG島及潛在轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn);所檢測(cè)肝癌細(xì)胞中OY-TES-1基因啟動(dòng)子呈較高的甲基狀態(tài)，甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑