胃癌形成過(guò)程中hTERT啟動(dòng)子甲基化狀態(tài)變化分析研究.pdf

1、目的：研究在胃癌進(jìn)展過(guò)程中hTERT基因啟動(dòng)子區(qū)CpG位點(diǎn)甲基化狀態(tài)變化情況，探討啟動(dòng)子區(qū)甲基化和hTERT基因表達(dá)及其與端粒酶活性的關(guān)系，為胃癌的早期診斷提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：提取正常胃粘膜、胃癌前病變、胃癌組織中的基因組DNA。利用亞硫酸氫鹽修飾基因組DNA，使hTERT啟動(dòng)子區(qū)CpG位點(diǎn)中，未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)變?yōu)槟蜞奏?U)。在不含CpG位點(diǎn)的位置設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序后與原序列比對(duì)，匯總每

2、組標(biāo)本中目的片段所含的27個(gè)CpG位點(diǎn)甲基化情況；利用PCR特異性擴(kuò)增hTERT基因，以瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)其在正常胃粘膜、胃癌前病變、胃癌組織中表達(dá)陽(yáng)性率；采用TRAP法檢測(cè)正常胃粘膜、胃癌前病變、胃癌組織中端粒酶活性。 結(jié)果： 1.胃癌組織中hTERT啟動(dòng)子區(qū)域甲基化程度高于胃癌前病變組和正常組，三組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 2.hTERT在胃癌中表達(dá)陽(yáng)性率高于胃癌前病變，正常胃粘膜中不表達(dá)，三組

3、間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 3.胃癌組端粒酶活性高于胃癌前病變組，正常胃粘膜未檢測(cè)到端粒酶活性，三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論： 正常胃粘膜hTERT啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度較胃癌前病變和胃癌低，提示在胃癌進(jìn)展過(guò)程中hTERT啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度逐漸增高，可作為腫瘤早期診斷的潛在分子生物學(xué)標(biāo)記。在胃癌進(jìn)展過(guò)程中hTERT啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度表達(dá)逐漸增高，且該基因表達(dá)與端粒酶活性也逐步增高，提示h