胃癌中錯(cuò)配修復(fù)基因hMLH1啟動(dòng)子甲基化對(duì)蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：胃癌是我國(guó)發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，但其發(fā)病機(jī)制不清楚。近年來(lái)，隨著胃癌分子生物學(xué)機(jī)制研究的進(jìn)展，錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的功能異常在胃癌發(fā)病中的作用引起了相關(guān)。研究者’的關(guān)注。錯(cuò)配修復(fù)基因是一組參與細(xì)胞基因損傷修復(fù)的基因，其主要功能是通過其編碼蛋白修復(fù)DNA復(fù)制時(shí)出現(xiàn)的堿基錯(cuò)配，維持基因組穩(wěn)定。hMLH1基因是錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的主要成員，hMLH1蛋白參與堿基的錯(cuò)配修復(fù)過程，其異常表達(dá)直接影響細(xì)胞錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)的功能。目前認(rèn)為導(dǎo)致該基因表達(dá)下調(diào)的

2、主要原因是基因突變及啟動(dòng)子異常甲基化。在國(guó)外的研究中已經(jīng)證實(shí)，結(jié)腸癌、肺癌等惡性腫瘤常有hMLH1基因啟動(dòng)子異常甲基化導(dǎo)致蛋白表達(dá)降低。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，hMLH1蛋白表達(dá)在不同例胃癌高低不一，但其原因仍未明確。有關(guān)國(guó)人胃癌hMLH1基因的甲基化狀態(tài)及其對(duì)該基因蛋白表達(dá)影響的研究尚少，亦無(wú)定論。明確這一問題，將對(duì)闡明胃癌的發(fā)病機(jī)制及建立胃癌的預(yù)警平臺(tái)有所幫助。 方法：收集2006年9～12月間大連市不同醫(yī)院未經(jīng)放化療的診斷明確

3、的胃癌手術(shù)切除標(biāo)本41例及同病例癌旁粘膜，制成蠟塊。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)全部病例hMLH1蛋白表達(dá)情況，分析胃癌組與癌旁組hMLH1蛋白表達(dá)量及細(xì)胞內(nèi)表達(dá)位置的差異。應(yīng)用甲基化特異性PCR(methylation-specific PCR，MSP)檢測(cè)全部病例hMLH1基因啟動(dòng)子甲基化情況，分析胃癌組與癌旁組hMLH1基因啟動(dòng)子甲基化的差異。按啟動(dòng)子甲基化有無(wú)，將病例分為啟動(dòng)子甲基化組和啟動(dòng)子未甲基化組，分析在所有病例中、胃癌組中、

4、癌旁組中hMLH1蛋白表達(dá)與啟動(dòng)子甲基化之間的關(guān)系。將啟動(dòng)子甲基化標(biāo)本按甲基化程度，分為完全甲基化組和部分甲基化組，分析所有病例中、胃癌組中、癌旁組中hMLH1蛋白表達(dá)與甲基化程度之間的關(guān)系。同時(shí)分析hMLH1基因啟動(dòng)子甲基化情況與患者性別、年齡、組織分化程度、腫瘤浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。結(jié)果：胃癌組與癌旁組hMLH1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為58.54﹪(24/41)和80.49﹪(33/

5、41)(P<0.05)。胃癌組與癌旁組核表達(dá)率分別為9.76﹪(4/41)和34.15﹪(14/41)(p<0.05)，漿表達(dá)率分別為34.15﹪(14/41)和14.63﹪(6/41)(p<0.05)，核與漿同時(shí)表達(dá)率分別為14.63﹪(6/41)和31.71﹪(13/41)(P>0.05)。 胃癌組與癌旁組hMLH1基因啟動(dòng)子甲基化率分別為80.49﹪(33/41)和24.39﹪(10/41)(P<0.05)，完全甲基化率分

6、別為41.46﹪(17/41)和19.51﹪(8/41)(p<0.05)，部分甲基化率分別為39.02﹪(16/41)和4.88﹪(2/41)(P<0.05)。 所有標(biāo)本中，啟動(dòng)子甲基化組的hMLH1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為41.86﹪(18/43)，顯著低于啟動(dòng)子未甲基化組的100.00﹪(39/39)(P<0.05)。 胃癌標(biāo)本中，啟動(dòng)子甲基化組的hMLH1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為48.48﹪(16/33)，顯著低于啟動(dòng)子未甲基化組

7、的100.00﹪(8/8)(P<0.05)。 癌旁標(biāo)本中，啟動(dòng)子甲基化組的hMLH1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為20.00﹪(2/10)，顯著低于啟動(dòng)子未甲基化組的100.00﹪(31/31)(P<0.05)。 所有啟動(dòng)子甲基化標(biāo)本中，完全甲基化組的hMLH1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為0﹪(0/25)，顯著低于部分甲基化組的100.00﹪(18/18)(P<0.05)。 胃癌組啟動(dòng)子甲基化標(biāo)本中，完全甲基化組的hMLH1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率

8、為0﹪(0/17)，顯著低于部分甲基化組的100.00﹪(16/16)(P<0.05)。 癌旁組啟動(dòng)子甲基化標(biāo)本中，完全甲基化組的hMLH1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為0﹪(0/8)，顯著低于部分甲基化組的100.00﹪(2/2)(P<0.05)。 hMLH1基因啟動(dòng)子甲基化率在男性與女性胃癌患者分別為81.58﹪(31/38)和66.67﹪(2/3)(P>0.05)，在50歲以下年齡組與50歲以上年齡組分別為50.00﹪(3/6)

9、和85.71﹪(30/35)(p>0.05)，在分化型胃癌與未分化型胃癌分別為81.25﹪(13/16)和80.00﹪(20/25)(P>0.05)，在未浸潤(rùn)肌層及浸潤(rùn)淺肌層的胃癌與浸潤(rùn)達(dá)到及超過深肌層的胃癌分別為77.78﹪(7/9)和81.25﹪(26/32)(P>0.05)，在伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌與淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移的胃癌分別為76.92﹪(10/13)和82.14﹪(23/28)(p>0.05)。 結(jié)論： 1.胃癌細(xì)胞存