啟動(dòng)子區(qū)甲基化對(duì)胃癌IRX1基因表達(dá)及生物學(xué)行為的影響.pdf

1、研究背景:IRX1基因是本課題組前期胃癌等位基因雜合性丟失(Lossof heterozygosity，LOH）篩查研究中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)候選抑癌基因，該基因位于5號(hào)染色體短臂5p15.33位點(diǎn)（Cancer Lett,2005,224:329）,該位點(diǎn)另外兩個(gè)基因是IRX2，CEI。其中IRX1與IRX2同屬于易洛魁家族同源盒基因，CEI 基因的表達(dá)亦與IRX2相關(guān)。已有研究顯示，在胃腸道表達(dá)的同源盒基因很多都與腫瘤發(fā)生相關(guān)。迄今為止，同源

2、盒基因IRX1變異是否與腫瘤發(fā)生、發(fā)展相關(guān)尚未見報(bào)道，但有文獻(xiàn)報(bào)道IRX1基因參與胚胎期前腸發(fā)育。因此推測(cè)該基因極有可能參與胃癌的發(fā)生。本課題以胃癌為研究對(duì)象，對(duì)IRX1基因從基因表達(dá)、啟動(dòng)子區(qū)甲基化修飾、體外去甲基化干預(yù)等層面進(jìn)行了探討。 材料與方法:利用RT-PCR 方法檢測(cè)胃癌細(xì)胞株及手術(shù)切除胃癌標(biāo)本中IRX1基因的mRNA 表達(dá)水平；通過測(cè)序技術(shù)檢測(cè)胃癌細(xì)胞IRX1基因的序列改變；借助于生物信息學(xué)在線軟件分析IRX1基因

3、的啟動(dòng)子區(qū)； MSP及BSP 法（methylation specific-PCR；Bisulfite sequence-PCR）檢測(cè)IRX1基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)；去甲基化試劑5-雜氮-2-脫氧胞苷（5-Aza-CdR）體外干預(yù)胃癌細(xì)胞后再運(yùn)用RT-PCR 及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)上海交通大學(xué)碩士學(xué)位論文檢測(cè)胃癌細(xì)胞IRX1基因mRNA 與蛋白的表達(dá)變化；同時(shí)運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)及MTT 法檢測(cè)5-Aza-CdR 處理對(duì)胃癌細(xì)胞增殖活性及細(xì)胞凋

4、亡的影響。 結(jié)果:體外培養(yǎng)的七株胃癌細(xì)胞株及10例(35.7％)胃癌組織中IRX1基因mRNA 表達(dá)有不同程度下調(diào)；經(jīng)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)獲得IRX1基因的啟動(dòng)子區(qū)域富含CpG 島；有四株胃癌細(xì)胞株的IRX1基因組DNA 序列分析檢測(cè)到一個(gè)單核苷酸多態(tài)性（SNP，Asn1324Asn，T→C，）；MSP 及BSP檢測(cè)顯示全部胃癌細(xì)胞株的IRX1啟動(dòng)子區(qū)域呈現(xiàn)高甲基化狀態(tài)；經(jīng)5-Aza-CdR處理后6株體外培養(yǎng)胃癌細(xì)胞株的IRX1基因表