廣西散發(fā)性結(jié)直腸癌錯配修復(fù)基因hMLH1突變研究.pdf

1、廣西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文廣西散發(fā)性結(jié)直腸癌錯配修復(fù)基因hMLH1突變研究姓名：徐艷松申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：結(jié)直腸肛門外科指導(dǎo)教師：唐衛(wèi)中20090501廣西散發(fā)性結(jié)直腸癌錯配修復(fù)基因hMLHl突變研究碩士學(xué)位論文DNA(n=44)，采用PCR方法擴(kuò)增hMLHl基因第8、12、14、15、16外顯子，PCR反應(yīng)體系組成及終濃度：模板DNA25pl，10Xbuffer50u1(25mmol／LMgcl。)，02pM上下游引物各1ul，25

2、mmol／1dNTPS4ul，1U／lllTaqDNA聚合酶O5|l1，雙蒸水36ul，反應(yīng)總體系為50u1循環(huán)條件：預(yù)熱94℃3分鐘，變性94℃30秒，退火55—63℃30秒，延伸72℃45秒，共30個循環(huán)的擴(kuò)增，最后72℃延t$5分鐘。通過單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析結(jié)合銀染色的方法找出異常條帶，有異常條帶的PCR產(chǎn)物純化后直接進(jìn)行DNA序列測序。仕甲二日木44ff0結(jié)直腸癌標(biāo)本中，有1例標(biāo)本的SSCP圖片出現(xiàn)異常泳動條帶，經(jīng)DNA正反雙向測