結(jié)直腸癌與錯配修復(fù)基因的研究.pdf

1、第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文結(jié)直腸癌與錯配修復(fù)基因的研究姓名：梅倩申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：孫樹漢20090501第二軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文摘要核苷酸多態(tài)性位點(包括hMSH2基因的全部12個位點)未在中國人群中檢測到或次等位基因頻率較低。三個hMLHI基因的多態(tài)性位點(hMLHl394GC，655A—G115lT_A)在中國人群中存在一定的發(fā)生頻率(88112％)。而且這些單核苷酸多態(tài)性位點還形成了一些特殊的單倍型組合，其中h

2、MLHI655A394C1151A組合與脅紀(jì)腳394G655G1151A組合只在散發(fā)性結(jié)直腸癌樣本中發(fā)現(xiàn)。而錯配修復(fù)基因缺陷結(jié)直腸癌與非缺陷結(jié)直腸癌相比有其獨特的分子、病理、臨床特征，表現(xiàn)為：微衛(wèi)星不穩(wěn)定性、多發(fā)于右半結(jié)腸、分化程度較低、多為粘液和髓狀癌以及明顯的癌周和瘤內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤。相對于錯配修復(fù)基因非缺陷結(jié)直腸癌，錯配修復(fù)基因缺陷結(jié)直腸癌有著較好的臨床預(yù)后，并且這種生存優(yōu)勢只與微衛(wèi)星穩(wěn)定性相關(guān)，而與其他臨床、病理分期無關(guān)。許多研究

3、已經(jīng)證實錯配修復(fù)基因缺陷與非缺陷結(jié)直腸癌之間存在著轉(zhuǎn)錄水平的mRNA表達(dá)差異，但對于轉(zhuǎn)錄后水平的情況尚不清楚。而microRNA是近年來新發(fā)現(xiàn)的一類長約1925個核苷酸的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控小RNA分子，它可以通過與靶基因mRNA的3’非翻譯區(qū)的特定互補部位結(jié)合而導(dǎo)致翻譯抑制或mRNA降解。正因為此，我們選擇了microRNA芯片和實時定量PCR技術(shù)來檢測錯配修復(fù)基因缺陷與非缺陷結(jié)直腸癌在轉(zhuǎn)錄后水平的差異。利用結(jié)直腸癌病例組織樣本和細(xì)胞系樣本分析

4、了錯配修復(fù)基因缺陷結(jié)直腸癌的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控表達(dá)譜，并進(jìn)一步分析了差異表達(dá)的miRNA在結(jié)直腸癌發(fā)生過程中的病理作用。共發(fā)現(xiàn)了8個miRNA在病例組織和細(xì)胞系樣本中表現(xiàn)出一致性的差異：5個高表達(dá)miRNA——miR2l，let7a，miR200b，miR200c，miR145和3個低表達(dá)miI礬A1iR127，miR155，miR133b。其中，miR21在錯配修復(fù)基因缺陷結(jié)直腸癌中高表達(dá)，并且在組織和細(xì)胞水平的聚類分析中均是最為突出的位點。

5、隨后通過生物信息學(xué)和實驗手段證實癌基因PLAGl是miR21的靶基因。同時由于PLAGl是IGF2基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，進(jìn)而又檢測了以上所有組織和細(xì)胞樣本中的IGF2基因的mRNA表達(dá)水平，證實其表達(dá)與它的調(diào)控因子PLAGl一致。更為重要的是利用細(xì)胞和人結(jié)直腸癌裸鼠模型進(jìn)行了一系列體內(nèi)和體外分析，發(fā)現(xiàn)下調(diào)PLAGl的表達(dá)或上調(diào)miR21的表達(dá)可以抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖，并促進(jìn)其凋亡。隨后通過裸鼠模型體內(nèi)實驗還發(fā)現(xiàn)，上調(diào)錯配修復(fù)基因非缺陷結(jié)直