胃癌中p16和DAPK基因啟動子異常甲基化及其蛋白表達的研究.pdf

1、目的:目前關于胃癌發(fā)生機制的研究主要集中于細胞和分子生物學水平，包括抑癌基因在內(nèi)的腫瘤相關基因的失活在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用?；虻氖Щ罘绞接泻芏?，而啟動子區(qū)CpG島的異常甲基化被認為是除突變和缺失以外導致抑癌基因失活的重要機制之一，可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用。本實驗通過檢測胃癌患者癌組織、相應的癌旁5cm正常組織以及良性胃黏膜組織中p16和DAPK基因啟動子CpG島的甲基化水平，探討這些基因啟動子異常甲基化在胃

2、癌發(fā)生發(fā)展中的作用。同時通過檢測胃癌組織中基因的蛋白表達水平，了解基因高甲基化與其蛋白表達缺失之間的關系。
　　 方法:收集三組組織標本，分別是胃癌組織、相應的癌旁5cm正常組織各123例，良性胃黏膜組織 (淺表胃炎或正常胃粘膜) 30例作為對照。常規(guī)酚/氯仿法抽提組織標本的基因組DNA，經(jīng)過亞硫酸氫鹽處理，采用目前常用的甲基化特異性PCR (Methylation-specific PCR，MSP)方法檢測上述三組標本中p16

3、基因和DAPK基因啟動子CpG島甲基化的狀況并分析每個基因甲基化程度與臨床參數(shù)之間的關系。采用免疫組織化學方法檢測胃癌組織標本中p16和DAPK基因的蛋白表達水平，進一步探討基因啟動子高甲基化與其蛋白表達之間的關系。
　　 結(jié)果: 30例良性胃黏膜組織中沒有檢測到基因的異常甲基化。123例胃癌組織中p16和DAPK基因的甲基化發(fā)生率分別是：69.1％ (85/123)、64.2％ (79/123)，而相應的癌旁5cm正常組織中，

4、p16和DAPK基因的甲基化率分別是：7.3％ (9/123)、34.1％ (42/123)，兩個基因甲基化陽性率在胃癌組織與癌旁正常組織之間的差異均具有統(tǒng)計學意義(both P<0.05)。且癌旁組織中p16和DAPK基因的甲基化狀況與癌組織之間具有明顯的一致性(Kp16=0.068，KDAPK=0.448，both P<0.05)。胃癌組織中p16基因啟動子區(qū)的甲基化程度與腫瘤分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度相性(P<0.05)，

5、DAPK基因啟動子區(qū)的甲基化程度與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(P<0.05)。此外，癌組織中p16和DAPK基因的蛋白表達水平與其甲基化水平呈明顯的負相關性。
　　 結(jié)論:胃癌中p16和DAPK基因啟動子異常高甲基化是一個頻繁事件，基因啟動子高甲基化是導致其蛋白表達缺失的重要機制之一，可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用。胃癌組織中p16和DAPK基因啟動子高甲基化可能作為評估胃癌惡性程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度的有效分子生物學指標