腹膜間皮細(xì)胞損傷的機(jī)制及表皮生長(zhǎng)因子修復(fù)作用的體外研究.pdf

1、目的：1.研究高糖對(duì)人腹膜間皮細(xì)胞（HPMCs）間粘合連接復(fù)合體及整合素表達(dá)的影響,探討腹膜透析中腹膜間皮細(xì)胞層完整性損傷的機(jī)制;2.探討腹膜透析透出液中表皮生長(zhǎng)因子（EGF）表達(dá)及意義;3.體外研究EGF在HPMCs損傷修復(fù)中的作用和機(jī)制.方法：1.采用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)、Westernblot及免疫熒光等方法檢測(cè)HPMCs粘合連接復(fù)合體主要成分鈣粘附分子-E-Cadherin、連環(huán)蛋白β-Catenin基因及蛋白水平表達(dá),用流

2、式細(xì)胞儀檢測(cè)其整合素表達(dá),采用免疫熒光技術(shù)觀察高糖對(duì)細(xì)胞肌動(dòng)蛋白微絲骨架的影響;2.用ELISA法檢測(cè)16例腹透患者透出液及血清中EGF的表達(dá);3.<'3>H胸腺嘧啶核苷摻入法、細(xì)胞計(jì)數(shù)法及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)EGF對(duì)HPMCs增殖、移行及粘附的影響;4.相關(guān)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,免疫組化觀察細(xì)胞角蛋白、波形蛋白、成纖維細(xì)胞特異性蛋白-1的表達(dá),ELISA檢測(cè)Ⅰ型膠原的水平,以探討EGF對(duì)HPMCs表型轉(zhuǎn)化的影響.結(jié)論：1.高糖使HPMC