抑制表皮生長因子信號通路對腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護作用及其分子機制的研究.pdf

1、第一部分EGFR信號通路對OGD-R處理的鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細胞活化增殖的調(diào)控作用及其機制研究
　　目的：細胞培養(yǎng)觀察OGD-R處理的鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細胞EGFR受體的激活與星形膠質(zhì)細胞活化增殖的關系及C225是否可以抑制OGD-R誘導的星形膠質(zhì)細胞的活化增殖，并對其機制進行進一步的探討。
　　方法：原代培養(yǎng)新生鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細胞，待其生長80％匯合后，用流式細胞儀技術對OGD處理2h后,隨不同復氧時間(3h,6h,1

2、2h,24h)和不同濃度C225（2μg/ml,10μg/ml）干預星形膠質(zhì)細胞的細胞周期進行分析，用pEGFR和GFAP免疫熒光雙標技術觀察各組pEGFR的表達情況及細胞形態(tài)的變化,BrdU摻入法觀察各組BrdU(+)細胞比率，并用westernblot技術對各組GFAP，pEGFR，p-ERK1/2，ki67，cyclind1，p27的表達進行分析。
　　結(jié)果：我們發(fā)現(xiàn)星形膠質(zhì)細胞OGD/R處理之后呈激活狀態(tài)，GFAP表達增多

3、，細胞胞體變大，突起變長，同時pEGFR的表達也明顯增加。GFAP和BrdU熒光雙標結(jié)果顯示在復氧12h的時候，BrdU(+)細胞率比對照組增加約2倍，應用C225后改變了激活細胞的形態(tài)變化及降低了BrdU(+)細胞率。流式細胞分析發(fā)現(xiàn)，在復氧的3-6小時內(nèi)處于S期細胞的百分比與對照組相比增高，在復氧12小時，達到高峰，隨后呈降低趨勢。在應用C225后，處于S期細胞的百分比在6,12,24小時與未用藥組比較明顯降低(P＜0.01)。We