抑制表皮生長因子信號通路對腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)保護(hù)作用及其分子機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分EGFR信號通路對OGD-R處理的鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞活化增殖的調(diào)控作用及其機(jī)制研究
　　目的：細(xì)胞培養(yǎng)觀察OGD-R處理的鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞EGFR受體的激活與星形膠質(zhì)細(xì)胞活化增殖的關(guān)系及C225是否可以抑制OGD-R誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化增殖，并對其機(jī)制進(jìn)行進(jìn)一步的探討。
　　方法：原代培養(yǎng)新生鼠大腦皮層星形膠質(zhì)細(xì)胞，待其生長80％匯合后，用流式細(xì)胞儀技術(shù)對OGD處理2h后,隨不同復(fù)氧時間(3h,6h,1

2、2h,24h)和不同濃度C225（2μg/ml,10μg/ml）干預(yù)星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞周期進(jìn)行分析，用pEGFR和GFAP免疫熒光雙標(biāo)技術(shù)觀察各組pEGFR的表達(dá)情況及細(xì)胞形態(tài)的變化,BrdU摻入法觀察各組BrdU(+)細(xì)胞比率，并用westernblot技術(shù)對各組GFAP，pEGFR，p-ERK1/2，ki67，cyclind1，p27的表達(dá)進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：我們發(fā)現(xiàn)星形膠質(zhì)細(xì)胞OGD/R處理之后呈激活狀態(tài)，GFAP表達(dá)增多

3、，細(xì)胞胞體變大，突起變長，同時pEGFR的表達(dá)也明顯增加。GFAP和BrdU熒光雙標(biāo)結(jié)果顯示在復(fù)氧12h的時候，BrdU(+)細(xì)胞率比對照組增加約2倍，應(yīng)用C225后改變了激活細(xì)胞的形態(tài)變化及降低了BrdU(+)細(xì)胞率。流式細(xì)胞分析發(fā)現(xiàn)，在復(fù)氧的3-6小時內(nèi)處于S期細(xì)胞的百分比與對照組相比增高，在復(fù)氧12小時，達(dá)到高峰，隨后呈降低趨勢。在應(yīng)用C225后，處于S期細(xì)胞的百分比在6,12,24小時與未用藥組比較明顯降低(P＜0.01)。We