表皮生長因子影響舌苔形成的分子機(jī)制研究.pdf

1、研究目的： 舌象的變化能客觀地反映出機(jī)體的正氣盛衰、病邪深淺，是體內(nèi)病變的一面鏡子，因而舌診在中醫(yī)對(duì)疾病的診斷上起著重要作用。近年來，隨著中醫(yī)現(xiàn)代化、科學(xué)化和國際化的發(fā)展，中醫(yī)得到了越來越多的肯定，并且發(fā)揮了越來越重要的作用，然而，如何使中醫(yī)診斷和治療客觀化、科學(xué)化仍是進(jìn)一步發(fā)揚(yáng)光大祖國醫(yī)學(xué)的關(guān)鍵問題。 現(xiàn)代研究表明舌苔的厚薄與舌上皮細(xì)胞的增殖、分化及凋亡之間的平衡密切相關(guān)。舌黏膜上皮屬于復(fù)層扁平上皮，舌上皮細(xì)胞在增殖、

2、分化的同時(shí)，有一部分細(xì)胞發(fā)生了細(xì)胞凋亡。當(dāng)舌上皮細(xì)胞增殖與分化、凋亡處于相對(duì)平衡狀態(tài)時(shí)，舌苔表現(xiàn)為薄苔；而當(dāng)細(xì)胞增殖占優(yōu)勢(shì)，細(xì)胞凋亡和分化相對(duì)占劣勢(shì)時(shí)，舌上皮細(xì)胞增多，舌苔即變厚，反之則出現(xiàn)剝苔。 臨床觀察發(fā)現(xiàn)腫瘤患者的舌苔、舌質(zhì)變化較為明顯，提示腫瘤在患者機(jī)體生長后對(duì)人體的影響。在腫瘤患者的舌苔變化與表皮生長因子（EGF）的關(guān)系研究中，我們觀察到腫瘤患者的舌苔增厚明顯較其它疾病患者及正常人顯著，同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤患者舌苔的變化

3、與其唾液中EGF含量密切相關(guān)，舌苔增厚的腫瘤患者唾液中EGF含量明顯增高。說明EGF與舌苔變化有著密切的關(guān)系。 為了進(jìn)一步分析EGF影響舌苔形成的機(jī)制，我們運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)、Real Time-PCR、基因芯片等現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，探討了EGF對(duì)舌黏膜上皮細(xì)胞增殖、凋亡、黏附分子及EGF-R表達(dá)等的影響。由于黏附分子在組織形態(tài)發(fā)生、組織形成等方面具有重要的作用，推測(cè)其可能與舌苔變化密切相關(guān)。研究黏附分子在舌黏膜組織上的表達(dá)，可能有

4、助于進(jìn)一步在分子水平上闡明舌苔形成的機(jī)制。 通過此項(xiàng)研究，可以：（1）分析EGF對(duì)舌黏膜上皮細(xì)胞EGF-R表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響，進(jìn)一步闡明EGF影響腫瘤病人舌苔變化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子機(jī)制；（2）分析EGF與舌黏膜上皮細(xì)胞黏附分子、細(xì)胞增殖凋亡相關(guān)基因表達(dá)的關(guān)系；（3）深入地研究表皮生長因子在舌苔形成中的作用，從基因、分子水平上探討舌苔變化的機(jī)制。（4）對(duì)不同舌苔類型的基因表達(dá)譜進(jìn)行分析，篩選出差異表達(dá)基因，為進(jìn)一步闡明舌苔形成的分子

5、機(jī)制研究提供依據(jù)。 研究方法： 本課題從細(xì)胞模型、臨床腫瘤患者兩個(gè)角度來探討EGF影響腫瘤患者舌苔形成的分子機(jī)制 1、EGF對(duì)舌鱗癌Tca-8113細(xì)胞增殖、基因表達(dá)影響的研究 （1）EGF對(duì)EGF-R表達(dá)以及細(xì)胞增殖影響的研究 通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分析EGF對(duì)舌鱗癌Tca-8113細(xì)胞EGF-R表達(dá)及細(xì)胞周期的影響。 （2）EGF對(duì)凋亡增殖相關(guān)基因Fas、c-myc表達(dá)影響的研究

6、通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分析EGF對(duì)舌鱗癌Tca-8113細(xì)胞凋亡增殖相關(guān)基因Fas、c-myc表達(dá)的影響。 （3）EGF對(duì)黏附分子表達(dá)影響的研究 通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)分析EGF對(duì)舌鱗癌Tca-8113細(xì)胞黏附分子CD29、CD54、CD106表達(dá)的影響。 2、臨床腫瘤患者不同舌苔類型基因表達(dá)差異的研究 不同舌苔的組織標(biāo)本均由江蘇省口腔醫(yī)院提供，參考《中醫(yī)診斷學(xué)》舌診標(biāo)準(zhǔn)，選擇口腔舌鱗癌切除術(shù)患者，用無菌手術(shù)獲取

7、舌背粘膜相應(yīng)正常的區(qū)域。不同舌苔病例分為以下5組：白薄苔組、白厚苔組、黃薄苔組、黃厚苔組、無苔組。對(duì)照組胎兒正常白薄苔（取自南京某醫(yī)院婦產(chǎn)科引產(chǎn)的存活胎兒）。 （1）EGF-R在腫瘤患者常見舌苔中表達(dá)水平的研究 通過Real Time-PCR技術(shù)對(duì)不同舌苔類型舌黏膜上皮細(xì)胞EGF-R表達(dá)差異進(jìn)行分析； （2）Fas在腫瘤患者常見舌苔中表達(dá)水平的研究 通過Real Time-PCR技術(shù)對(duì)不同舌苔類型舌黏膜上

8、皮細(xì)胞Fas表達(dá)差異進(jìn)行分析； （3）c-myc、CD29在腫瘤患者常見舌苔中表達(dá)水平的研究 應(yīng)用HE染色觀察不同舌苔類型舌粘膜組織結(jié)構(gòu)，應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)并分析舌癌病人舌粘膜上皮細(xì)胞c-myc、CD29的表達(dá)水平。 （4）常見不同舌苔的表達(dá)譜基因芯片分析研究 通過基因芯片技術(shù)檢測(cè)分析不同舌苔類型之間舌黏膜上皮細(xì)胞差異表達(dá)的基因，并進(jìn)行篩選； 結(jié)論： 1、EGF通過作用于舌黏膜上皮細(xì)胞

9、的EGF-R，促進(jìn)細(xì)胞增殖，同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)更多的EGF-R，而使EGF的利用增多。 2、EGF對(duì)舌黏膜上皮細(xì)胞凋亡基因Fas及增殖分化相關(guān)基因c-myc的表達(dá)都有促進(jìn)作用，并以對(duì)c-myc的促進(jìn)作用更為強(qiáng)烈。EGF可能一方面通過使舌粘膜上皮細(xì)胞Fas蛋白表達(dá)增高，促使舌粘膜上皮細(xì)胞凋亡；另一方面，又能促使c-myc持續(xù)高表達(dá)，使舌上皮細(xì)胞過度增殖，舌粘膜上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)降低，進(jìn)而形成病理性厚苔。 3、EGF對(duì)舌黏膜上皮

10、細(xì)胞表面黏附分子的表達(dá)有著重要的影響。EGF能明顯促進(jìn)舌黏膜上皮細(xì)胞CD29、CD54的表達(dá)，其中又以對(duì)CD29作用更為強(qiáng)烈，能使CD29持續(xù)高表達(dá)。EGF可能通過促進(jìn)舌黏膜上皮細(xì)胞CD29、CD54的表達(dá)，介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間的粘附，從而影響舌苔形成。 4、通過基因芯片的研究，我們尋找到了部分可能在舌苔形成中或影響患者舌苔變化的相關(guān)基因，它們主要與離子通道和運(yùn)輸?shù)鞍谆?、?xì)胞周期蛋白類基因、細(xì)胞骨架和運(yùn)動(dòng)基因、