EB病毒潛伏膜蛋白1調(diào)節(jié)表皮生長因子受體的分子機(jī)制.pdf

1、該文以Tet-on-LMP1 HNE2鼻咽癌細(xì)胞為動態(tài)研究模型,以間接免疫熒光法聯(lián)合激光共聚焦熒光顯微鏡技術(shù)、Western Blot印跡法、免疫共沉淀-Western印跡法、染色質(zhì)免疫共沉淀-PCR、點突變技術(shù)、熒光酶基因報道系統(tǒng)、EMSA和SuperShift法及流式細(xì)胞分析與分選術(shù)等為主要技術(shù),結(jié)合信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中誘導(dǎo)及阻斷策略,取得如下重要的創(chuàng)新性發(fā)現(xiàn):1.首次發(fā)現(xiàn)LMP1可同時上調(diào)EGFR蛋白和功能性磷酸化水平,并呈劑量依賴效應(yīng).L

2、MP1反義寡核酸可部分有效地阻斷EGFR的磷酸化水平,而EGFR顯性突變體可完全阻斷其磷酸化.2.首次發(fā)現(xiàn)LMP1可反式激活EGFR啟動子活性,并在一定程度上呈正相關(guān)效應(yīng),EGFR顯性負(fù)性突變體和LMP1 Antisense可阻斷LMP1反式激活EGFR啟動子的作用; LMP1主要通過其CTAR1上調(diào)EGFR啟動子活性,而CTAR2則起部分的作用;LMP1主要通過其CTAR1活化NFκB信號通路上調(diào)EGFR啟動子活性,LMP1所激活的A

3、P-1信號通路也參與其中的反式激活作用,但以NFκB信號通路為主;通過生物信息學(xué)發(fā)現(xiàn)EGFR啟動子存在兩個NFκB,進(jìn)一步證實LMP1反式激活EGFR啟動子活性為NFκB所依賴.3.首次發(fā)現(xiàn)LMP1可調(diào)控EGFR的核移位,并呈一定的劑量效應(yīng),并且發(fā)現(xiàn)EGFR的核定位信號在其核移位過程中起著一定的作用,并初步證實LMP1調(diào)控EGFR核移位為配體非依賴性,同時還發(fā)現(xiàn)LMP1調(diào)控EGFR核移位可能與NFκB信號通路有關(guān).4.在LMP1的調(diào)控下

4、,首次發(fā)現(xiàn)核內(nèi)EGFR可直接調(diào)節(jié)與G1/S期重要的調(diào)節(jié)因子cyclinD1和cyclinE,通過影響細(xì)胞周期各期調(diào)節(jié)分子,導(dǎo)致更多的G0期進(jìn)入細(xì)胞周期,由G1期進(jìn)入S期細(xì)胞增加.在LMP1調(diào)控下,首次發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄因子EGFR進(jìn)一步加速細(xì)胞周期演進(jìn),特別是G1/S轉(zhuǎn)換進(jìn)一步加強(qiáng).進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)在LMP1調(diào)控下,EGFR明顯影響細(xì)胞周期G1/S期重要調(diào)節(jié)因子,并且不同EGFR突變體對進(jìn)一步加速細(xì)胞周期演進(jìn)的作用機(jī)制也不盡相同.通過該研究將信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和