不同轉(zhuǎn)移潛能人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株基因表達(dá)譜變化的研究.pdf

1、背景與目的:肺癌是當(dāng)今世界上對人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤，也是臨床治療療效最差的惡性腫瘤。肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致肺癌病人治療失敗和死亡的首要原因，因此探討肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用前景。而肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移是極其復(fù)雜的多基因調(diào)控和多步驟發(fā)展過程，涉及腫瘤細(xì)胞、機(jī)體、靶組織的相互影響和作用，涉及一系列腫瘤相關(guān)基因的調(diào)節(jié)和信號傳導(dǎo)。對于這些數(shù)量龐大的基因，傳統(tǒng)的研究方法(如Southern blot、Northe

2、rn blot、RT-PCR等)有其局限性，只能研究一個或幾個基因以及它們之間簡單的調(diào)控關(guān)系，無法全面認(rèn)識肺癌發(fā)生發(fā)展侵襲轉(zhuǎn)移過程中各基因之間復(fù)雜的相互調(diào)控關(guān)系。而伴隨著人類基因組計(jì)劃的而發(fā)展起來的基因芯片(genechi-p/DNAmicroarray)技術(shù)，具有高通量、大規(guī)模、高靈敏性、高度自動化和重復(fù)性的特點(diǎn)，能同時檢測整個腫瘤基因組的變化，使研究者能從基因組水平上系統(tǒng)、全面的分析腫瘤發(fā)生、發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)理。人大細(xì)胞肺癌細(xì)

3、胞株NL9980和L9981是具有相同的遺傳學(xué)背景的同源細(xì)胞株，其中NL9980具有低轉(zhuǎn)移性，L9981具有高轉(zhuǎn)移性，它們之間具有高度的可比性，是研究侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制的良好模型，通過對細(xì)胞形態(tài)、生物學(xué)特性、表達(dá)基因及蛋白差異等比較，可以探討其與侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)系和作用機(jī)制。本研究旨在使用基因芯片比較不同轉(zhuǎn)移潛能的人大細(xì)胞肺癌同源細(xì)胞株NL9980和L9981的基因表達(dá)譜變化，初步探討不同轉(zhuǎn)移潛能的人大細(xì)胞肺癌的基因表達(dá)特點(diǎn)及篩選轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，

4、為肺癌的診斷、預(yù)后提供分子生物學(xué)指標(biāo)，并從整個基因網(wǎng)絡(luò)水平對肺癌的侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制進(jìn)行初步探討。 方法:提取并純化NL9980和L9981細(xì)胞的總RNA，以O(shè)ligo dTPrimer為引物反轉(zhuǎn)錄生成cDNA，然后經(jīng)體外轉(zhuǎn)錄(ⅣT)生成標(biāo)記有生物素的cRNA，純化的cRNA片段化為35-200bp的小片段后與Affymetrix HG U133 Plus 2.0芯片雜交，經(jīng)洗滌染色掃描后得到兩個細(xì)胞的表達(dá)譜。應(yīng)用GCOS軟件比較兩個

5、細(xì)胞株的差異探針，將得到的差異探針進(jìn)行注釋，分類，信號通路分析，從中篩選轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因和信號通路。 結(jié)論: 1．不同轉(zhuǎn)移潛能人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株NL9980和L9981具有不同的基因表達(dá)譜。 2．人高轉(zhuǎn)移大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株L9981中存在促進(jìn)肺癌轉(zhuǎn)移基因的過度表達(dá)和抑制肺癌轉(zhuǎn)移基因的低表達(dá)。這些差異基因主要涉及侵襲轉(zhuǎn)移、黏附、血管生成、細(xì)胞骨架、腫瘤形成和細(xì)胞生長、分化、凋亡以及與侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的信號通路。 3