不同轉(zhuǎn)移潛能大腸癌細胞株差異表達蛋白的蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、目的和意義：觀察5-氟尿嘧啶（5-FU）對不同轉(zhuǎn)移潛能大腸癌細胞株的抑制作用，應(yīng)用雙向凝膠電泳技術(shù)，建立不同轉(zhuǎn)移潛能大腸癌細胞株以及5-FU處理后的雙向凝膠電泳圖譜。通過比較兩種不同轉(zhuǎn)移潛能大腸癌細胞株的蛋白質(zhì)表達譜的變化，從蛋白質(zhì)水平上對大腸癌的轉(zhuǎn)移機制作初步探討；通過比較5-FU處理前后大腸癌細胞株的蛋白質(zhì)表達譜的變化，從蛋白質(zhì)水平上對5-FU抑制大腸癌轉(zhuǎn)移機制作初步的探討。 研究方法：(1)應(yīng)用MTT比色分析法觀察5-FU

2、對兩種不同轉(zhuǎn)移潛能的人大腸癌細胞株的生長抑制情況，確立5-FU處理兩種大腸癌細胞的濃度。(2)分組分為Lovo細胞組(A組)、SW480細胞組（B組）、Lovo細胞5-FU處理組（C組）、SW480細胞5-FU處理組（D組）（3）利用雙向凝膠電泳(Two-dimensional electrophoresis，2-DE)分離總蛋白質(zhì)，凝膠銀染及考馬斯亮藍染顯色，建立雙向凝膠電泳圖譜，經(jīng)Imgae Master軟件進行圖像分析，篩選部分分

3、離較好的差異蛋白質(zhì)點。(4)應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間/飛行時間譜(Matrix-assistde laser desorption/ionization time-of-flihgt time-of-flight mass spectrometry MALDI-TOF-TOF-MS)分析部分差異表達的蛋白質(zhì)點，獲取肽質(zhì)量指紋圖譜，Mascot軟件搜索NCBInr數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質(zhì)。（5）應(yīng)用Western blot驗證蛋白質(zhì)表達情

4、況。 結(jié)果：(1)MTT法顯示5-FU在0～12.5μg/ml范圍對Lovo細胞具有明顯生長抑制作用，而5-FU在0～25μg/ml范圍對SW480細胞有明顯生長抑制作用，計算5-FU對兩種大腸癌細胞株的IC50濃度分別為4.13μg/ml、12.86μg/ml（2）篩選出具有明顯表達差異的蛋白質(zhì)點共94個，選取其中24個蛋白質(zhì)點進行質(zhì)譜鑒定，成功鑒定出了16個蛋白，包括埃茲蛋白（Ezrin）、NM23A蛋白（non-metas

5、tatic cells 1,protein(NM23A）expressed in）、HSPA8（heat shock 70kDa protein 8）、核內(nèi)不均一核糖核蛋白K（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K）、二硫鍵異構(gòu)酶A（protein disulfide isomerase A）、角蛋白10（keratin 10）、PP4蛋白（protein PP4），Western blot驗