不同鹽度脅迫下綠竹差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、福建東南沿海地區(qū)將綠竹等大型叢生竹引種作為沿海防護(hù)林樹種，極大改善了沿海防護(hù)林的生態(tài)結(jié)構(gòu)，其中綠竹為適應(yīng)性較好的竹種之一，研究其耐鹽機(jī)制對(duì)選育抗鹽株系顯得尤為重要，目前相關(guān)研究都是從鹽脅迫對(duì)綠竹的生理生化水平上進(jìn)行的，未涉及到竹類耐鹽相關(guān)的蛋白組學(xué)水平，未發(fā)現(xiàn)鹽脅迫對(duì)竹類差異蛋白質(zhì)組的相關(guān)研究報(bào)道。本研究結(jié)合前人研究的成果,以福建省漳州市赤山林場(chǎng)沿海沙地防護(hù)林引種綠竹為研究材料，通過無性系綠竹材料的獲取、葉片蛋白電泳體系的構(gòu)建、鹽脅迫響

2、應(yīng)蛋白分離并通過質(zhì)譜技術(shù)鑒定，研究響應(yīng)蛋白的種類與功能，探討綠竹對(duì)鹽脅迫的差異蛋白響應(yīng)機(jī)制，進(jìn)而從分子水平研究綠竹在鹽脅迫時(shí)蛋白表達(dá)的變化，從基因水平為竹類耐鹽性鑒定及耐鹽性新品種選育提供理論基礎(chǔ)。
　　在無性系綠竹材料獲取的研究中，通過8組綠竹正交扦插處理，統(tǒng)計(jì)生根率，分析得出適用于綠竹扦插育苗的扦插方案：扦插材料選用帶兜部的完整綠竹側(cè)枝，留3-4節(jié)，去枝葉，流水浸泡過夜后用500ppmABT生根粉溶液進(jìn)行激素處理，處理后枝條扦

3、插至沙土泥炭混合基質(zhì)中。
　　綠竹葉片全蛋白的雙向電泳體系構(gòu)建研究中，獲得適用于綠竹葉片雙向電泳體系：蛋白樣品采用TCA/丙酮+SDS酚抽提取法獲取，在17cm pH3-10 IPG膠條中水化上樣采用被動(dòng)水化24小時(shí)，一向IEF時(shí)樣品膠條采用膠面向上模式聚集，聚焦程序設(shè)置為80000Vh，可獲得重復(fù)性好、分辨率高的凝膠圖像。
　　對(duì)綠竹無性系種苗分別用0.3％和0.5%NaCl處理兩周后對(duì)葉片總蛋白進(jìn)行雙向電泳，0.3%濃度

4、對(duì)照組和試驗(yàn)組分別測(cè)得895、884、841、754、786、738個(gè)蛋白點(diǎn)；0.5%濃度對(duì)照組和試驗(yàn)組分別測(cè)得980、953、942、762、715、730個(gè)蛋白點(diǎn)。0.3%輕度脅迫誘導(dǎo)發(fā)現(xiàn)394個(gè)鹽脅迫響應(yīng)蛋白點(diǎn)：36個(gè)新增蛋白點(diǎn)，7個(gè)消減蛋白點(diǎn)，213個(gè)上調(diào)蛋白點(diǎn)，138個(gè)下調(diào)蛋白。挑選6個(gè)顯著差異點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF-MS檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)與粳稻同源功能蛋白Os02g0598300和假定蛋白TRIUR3_08890為新增表達(dá)蛋白，類

5、小米DNA引發(fā)酶大亞基、磷酸丙糖異構(gòu)酶在鹽脅迫誘導(dǎo)中表達(dá)上調(diào)，類小米DNA錯(cuò)配修復(fù)蛋白MSH7、tRNA二甲基烯丙基轉(zhuǎn)移酶在鹽脅迫誘導(dǎo)中表達(dá)下調(diào)。0.5%重度脅迫誘導(dǎo)發(fā)現(xiàn)338個(gè)鹽脅迫響應(yīng)蛋白點(diǎn)：115個(gè)新增蛋白點(diǎn)，73個(gè)消減蛋白點(diǎn)，93個(gè)上調(diào)蛋白點(diǎn)，57個(gè)下調(diào)蛋白。切取9個(gè)表達(dá)差異較顯著的蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF-MS檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)未知蛋白loc100276336、70 kDa熱激相關(guān)蛋白、argonaute1B蛋白、甘油醛-3-磷酸