不同鹽度脅迫下綠竹差異蛋白質組學研究.pdf

1、福建東南沿海地區(qū)將綠竹等大型叢生竹引種作為沿海防護林樹種，極大改善了沿海防護林的生態(tài)結構，其中綠竹為適應性較好的竹種之一，研究其耐鹽機制對選育抗鹽株系顯得尤為重要，目前相關研究都是從鹽脅迫對綠竹的生理生化水平上進行的，未涉及到竹類耐鹽相關的蛋白組學水平，未發(fā)現鹽脅迫對竹類差異蛋白質組的相關研究報道。本研究結合前人研究的成果,以福建省漳州市赤山林場沿海沙地防護林引種綠竹為研究材料，通過無性系綠竹材料的獲取、葉片蛋白電泳體系的構建、鹽脅迫響

2、應蛋白分離并通過質譜技術鑒定，研究響應蛋白的種類與功能，探討綠竹對鹽脅迫的差異蛋白響應機制，進而從分子水平研究綠竹在鹽脅迫時蛋白表達的變化，從基因水平為竹類耐鹽性鑒定及耐鹽性新品種選育提供理論基礎。
　　在無性系綠竹材料獲取的研究中，通過8組綠竹正交扦插處理，統(tǒng)計生根率，分析得出適用于綠竹扦插育苗的扦插方案：扦插材料選用帶兜部的完整綠竹側枝，留3-4節(jié)，去枝葉，流水浸泡過夜后用500ppmABT生根粉溶液進行激素處理，處理后枝條扦

3、插至沙土泥炭混合基質中。
　　綠竹葉片全蛋白的雙向電泳體系構建研究中，獲得適用于綠竹葉片雙向電泳體系：蛋白樣品采用TCA/丙酮+SDS酚抽提取法獲取，在17cm pH3-10 IPG膠條中水化上樣采用被動水化24小時，一向IEF時樣品膠條采用膠面向上模式聚集，聚焦程序設置為80000Vh，可獲得重復性好、分辨率高的凝膠圖像。
　　對綠竹無性系種苗分別用0.3％和0.5%NaCl處理兩周后對葉片總蛋白進行雙向電泳，0.3%濃度

4、對照組和試驗組分別測得895、884、841、754、786、738個蛋白點；0.5%濃度對照組和試驗組分別測得980、953、942、762、715、730個蛋白點。0.3%輕度脅迫誘導發(fā)現394個鹽脅迫響應蛋白點：36個新增蛋白點，7個消減蛋白點，213個上調蛋白點，138個下調蛋白。挑選6個顯著差異點進行MALDI-TOF-MS檢測，發(fā)現與粳稻同源功能蛋白Os02g0598300和假定蛋白TRIUR3_08890為新增表達蛋白，類

5、小米DNA引發(fā)酶大亞基、磷酸丙糖異構酶在鹽脅迫誘導中表達上調，類小米DNA錯配修復蛋白MSH7、tRNA二甲基烯丙基轉移酶在鹽脅迫誘導中表達下調。0.5%重度脅迫誘導發(fā)現338個鹽脅迫響應蛋白點：115個新增蛋白點，73個消減蛋白點，93個上調蛋白點，57個下調蛋白。切取9個表達差異較顯著的蛋白點進行MALDI-TOF-MS檢測，發(fā)現未知蛋白loc100276336、70 kDa熱激相關蛋白、argonaute1B蛋白、甘油醛-3-磷酸