蛋白質組學技術研究在樂果脅迫下牡蠣生殖腺和鰓差異表達的蛋白質.pdf

1、樂果(Dimethoate，DM)是目前農業(yè)生產過程中使用最為廣泛的有機磷農藥之一。的健康與生存。有機磷農藥對人類影響最大是大腦，目前已進行大量科學研究，并有詳細的研究報道，但對水生生物的生殖與呼吸系統(tǒng)的毒理學研究并不多。本論文以牡蠣為實驗物種，以它的生殖腺和鰓為實驗材料，選擇DM為有機磷農藥為污染物和諸多分析技術研究DM對牡蠣生殖腺和鰓所產生的毒性效應。
　　在濃度為1.0mg/L，2.0mg/L，5.0mg/L樂果，脅迫48h

2、的條件下，牡蠣的生殖腺和鰓器官中均能檢測出不同濃度的樂果殘留量，且組織中樂果殘留量隨著環(huán)境樂果濃度增高而呈現(xiàn)上升趨勢。這些現(xiàn)象說明了樂果能夠在富集于牡蠣，并遷移且累積在鰓和生殖腺中，影響到鰓和生殖腺執(zhí)行正常的生理功能，可能誘導出許多應激功能蛋白。對牡蠣鰓和生殖腺中的有機磷農藥的過度使用造成了嚴重的環(huán)境污染，土壤中殘留的有機磷農藥可通過河流的擴散作用，最終匯入大海，富集于牡蠣等各種近海養(yǎng)殖水產品體內，并通過食物鏈途徑影響到人類抗氧化酶過氧

3、化氫酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)酶活性進行分析，實驗結果表明，在2mg/L樂果的脅迫下，隨著脅迫時間的延長，鰓和生殖腺中的CAT酶和SOD酶活性都呈現(xiàn)出先上升而后降低的趨勢，這說明了樂果能夠引發(fā)牡蠣的應激反應，使牡蠣鰓和生殖腺中抗氧化酶活性的提高，并引發(fā)一系列的后續(xù)效應，誘導差異蛋白的產生。
　　采用蛋白質組學及相關的分析技術篩選出在樂果脅迫前后，牡蠣生殖腺和鰓中表達的應激差異蛋白.在生殖腺中已鑒定出12個差異蛋白，其中

4、9個蛋白表達量下調，3個蛋白表達量上調;在鰓中已鑒定出14個差異蛋白，其中11個蛋白表達量下調，3個蛋白表達量上調。針對這些差異蛋白的生理功能進行檢索比對和文獻查閱，總結出主要影響的是參與氧化應激、能量代謝、DNA復制與轉錄、細胞周期調控等過程有關重要功能蛋白，其中氧化應激相關的蛋白，如HSTF等表達量上調，而FAD依賴的氧化還原酶和Cavortin表達量卻下調。DNA復制與轉錄相關蛋白中，AGT表達量上調，Ribosomal S2表達

5、量下調。細胞周期調控相關蛋白Cdc2和Megator表達量下調，14-3-3蛋白表達量上調。能量代謝相關的蛋白中，Malate dehydrogenase表達量下調，而Glutamine synthetase表達量上調。采用Real-time PCR技術進一步佐證Cavortin、14-3-3、Ribosomal S2，Malate dehydrogenase等差異蛋白的mRNA表達量的變化趨勢，其中這些差異蛋白對應的mRNA表達量變化