奧曲肽對人大腸癌細胞系SW480影響的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文奧曲肽對人大腸癌細胞系SW480影響的蛋白質(zhì)組學(xué)研究姓名：胡偉申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：鐘德玝20060401博士學(xué)位論文中文摘要2DE)分離實驗組和對照組的人大腸癌細胞系SW480的總蛋白質(zhì)，凝膠銀染及考馬斯亮藍染顯色，建立雙向凝膠電泳圖譜，經(jīng)ImageMaster軟件進行圖像分析，篩選部分分離較好的差異蛋白質(zhì)點。(4)應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間／飛行時間譜(Matrixassistedlase

2、rdesorption／ionizationtimeofflighttimeofflightmassspectrometryMALDITOFTOFMS)分析部分差異表達的蛋白質(zhì)點，獲取肽質(zhì)量指紋圖譜，Mascot軟件搜索NCBInr數(shù)據(jù)庫鑒定蛋白質(zhì)。結(jié)果：(1)MTT法顯示奧曲肽在625～200OOng／ml濃度范圍對SW480細胞有明顯的生長抑制作用，并以濃度2500ng／ml時的抑制作用為最強。濃度在25OOng／ml以上抑制作用并

3、不繼續(xù)增加。(2)ImageMaster軟件分析3次相同條件下的2DE圖譜，結(jié)果顯示重復(fù)性、匹配性較好。對照組檢測到(1091448)個蛋白點，平均匹配率894％；處理組檢測到(98537)個蛋白點，平均匹配率886％。對照組和實驗組的3塊不同的膠間蛋白質(zhì)點在等電聚焦(Isoelectricfocusing，IEF)方向的偏差為O6920186mm和08420158mm，在十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(Sodiumdoecylsul

4、fateopolyacrylamidegelelectrophoresis，SDS—PAGE)方向上的偏差為1242土0236mm和1376土0312mm。制得對照組和實驗組平均膠，以平均膠進行匹配，匹配率為804％。(3)篩選出差異表達蛋白質(zhì)點136個，其中50個表達上調(diào)，47個表達下調(diào)，39個未匹配。(4)選取奧曲肽處理后上調(diào)、下調(diào)或未匹配的蛋白質(zhì)點共10個進行質(zhì)譜分析，從中獲得9張較好的肽質(zhì)量指紋，鑒定了7個蛋白質(zhì)。包括電壓依賴性