奧曲肽與塞來昔布聯(lián)合應(yīng)用對人結(jié)腸癌SW480細胞及其Wnt-β-catenin信號通路的影響.pdf

1、目的
　　研究奧曲肽與塞來昔布聯(lián)合應(yīng)用對人結(jié)腸癌 SW480細胞生長增殖及其 Wnt/β-catenin信號通路的抑制作用,探討兩藥間的聯(lián)合效應(yīng)及可能機制,為臨床兩藥聯(lián)合應(yīng)用治療腫瘤提供實驗和理論依據(jù)。
　　方法
　　以人結(jié)腸癌SW480細胞株為實驗對象,分為對照組、奧曲肽組、塞來昔布組和聯(lián)合組四組。MTT比色分析法分析不同濃度奧曲肽與塞來昔布單獨及聯(lián)合應(yīng)用對 SW480細胞生長增殖的抑制作用;利用中效原理分析兩藥聯(lián)合

2、應(yīng)用的效應(yīng);Western-blot法分析奧曲肽與塞來昔布單獨及聯(lián)合應(yīng)用對Wnt/β-catenin信號通路關(guān)鍵因子β-catenin蛋白表達的影響;免疫細胞化學(xué)法檢測奧曲肽與塞來昔布單獨及聯(lián)合作用對β-catenin蛋白分布及表達的影響;RT-PCR法分析奧曲肽與塞來昔布單獨及聯(lián)合應(yīng)用對 Wnt/β-catenin信號通路下游靶基因 c-myc mRNA表達的影響。
　　結(jié)果
　　1 MTT比色分析法分析:奧曲肽(10-1

3、110-1010-910-810-710-6 mol/l)與塞來昔布(10-910-810-710-610-510-4 mol/l)單獨及聯(lián)合應(yīng)用(10-11+10-910-10+10-810-9+10-710-8+10-610-7+10-510-6+10-4 mol/l)在24小時和48小時內(nèi)均能抑制SW480細胞生長增殖并呈劑量依賴性(P<0.05),且兩藥聯(lián)合應(yīng)用效應(yīng)明顯。
　　2中效原理分析兩藥聯(lián)合應(yīng)用效應(yīng):24小時達到5

4、0％抑制率時的用藥劑量奧曲肽為5.3914×10-8mol/l、塞來昔布為1.3703×10-6mol/l、聯(lián)合組中奧曲肽為3.0073×10-9 mol/l、塞來昔布為3.0073×10-7mol/l,聯(lián)合組用藥劑量明顯低于各單獨用藥劑量;48小時達到50%抑制率時的用藥劑量:奧曲肽為2.4923×10-8mol/l、塞來昔布為5.5808×10-7mol/l,聯(lián)合組中奧曲肽為9.2274×10-10 mol/l、塞來昔布為9.227

5、4×10-8mol/l,聯(lián)合用藥組劑量明顯低于各單獨用藥劑量。中效原理分析提示在24小時和48小時兩藥聯(lián)合應(yīng)用均具有協(xié)同作用(CI<1)。
　　3 Western-blot法分析SW480細胞中β-catenin蛋白的表達水平:對照組、奧曲肽組(10-6mol/l)、塞來昔布組(10-4mol/l)、聯(lián)合用藥組(10-6mol/l+10-4mol/l)處理后β-catenin蛋白的相對表達量分別為0.710±0.053、0.648

6、±0.031、0.667±0.022和0.545±0.051,LSD法組間多重比較,差異具有顯著性(P<0.05)。提示奧曲肽與塞來昔布單獨及聯(lián)合用藥均能下調(diào)SW480細胞中總的β-catenin蛋白表達水平,且奧曲肽與塞來昔布聯(lián)合用藥效應(yīng)比單獨用藥明顯。
　　4免疫細胞化學(xué)法檢測SW480細胞中β-catenin蛋白分布及表達:對照組、奧曲肽組(10-6mol/l)、塞來昔布(10-4mol/l)、聯(lián)合用藥組(10-6mol/l

7、+10-4mol/l)處理后β-catenin蛋白表達光密度值分別為0.4189±0.0097,0.3635±0.0098,0.3756±0.0087和0.2829±0.0075,LSD法組間多重比較,差異具有顯著性(P<0.05)。提示奧曲肽與塞來昔布單獨及聯(lián)合用藥均能減低SW480細胞中總的β-catenin蛋白表達,且奧曲肽與塞來昔布聯(lián)合用藥效應(yīng)比單獨用藥明顯。
　　5 RT-PCR法分析SW480細胞中c-myc mRNA

8、表達:對照組、奧曲肽(10-6mol/l)、塞來昔布(10-4mol/l)、聯(lián)合用藥組(10-6mol/l+10-4mol/l)中 c-myc mRNA相對表達量分別為0.929±0.033、0.811±0.015、0.806±0.041、0.718±0.025,LSD法組間多重比較,差異具有顯著性(P<0.05)。提示奧曲肽與塞來昔布單獨及聯(lián)合用藥均能下調(diào) SW480細胞中癌基因 c-myc mRNA表達,且奧曲肽與塞來昔布聯(lián)合應(yīng)用比