奧曲肽對結(jié)腸癌細(xì)胞SW480及Wnt-β-catenin信號傳導(dǎo)通路的影響.pdf

1、目的： 研究不同濃度生長抑素類似物奧曲肽對結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、凋亡和細(xì)胞周期的影響；探討奧曲肽對結(jié)腸癌細(xì)胞Wnt/β-catenin信號傳導(dǎo)通路中相關(guān)基因及β-catenin 和phosph-β-catenin蛋白表達的作用，尋找其作用靶點，進一步闡明生長抑素抗腫瘤作用機制。 方法： 以人結(jié)腸癌細(xì)胞系SW480為實驗對象，采用MTT比色法測定不同濃度奧曲肽對SW480細(xì)胞增殖的抑制作用；采用PI標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)分析奧曲

2、肽對SW480細(xì)胞凋亡與細(xì)胞周期的影響；利用基因芯片技術(shù)檢測不同濃度奧曲肽對結(jié)腸癌SW480細(xì)胞Wnt/β-catenin信號傳導(dǎo)通路中相關(guān)基因表達的影響，分析差異表達基因；應(yīng)用Western-blot法分析不同濃度奧曲肽對SW480細(xì)胞中β-catenin 及phosph-β-catenin蛋白表達的影響。 結(jié)果： 1. 奧曲肽能抑制SW480細(xì)胞的增殖，并在10-12 M -10-10M（mol/L）濃度范圍內(nèi)呈劑量

3、依賴性，在48小時內(nèi)呈時間依賴性。奧曲肽在10-10M時抑制作用最強（P﹤0.01），10-13M以下對細(xì)胞增殖無抑制作用。 2. 奧曲肽能誘導(dǎo)SW480細(xì)胞凋亡，在10-12 M -10-10M范圍內(nèi)呈劑量依賴性。 3.10-12 M -10-10M奧曲肽作用SW480細(xì)胞48小時后，細(xì)胞G1期逐漸增多，S期逐漸減少。 4. 10-10M奧曲肽使結(jié)腸癌SW480細(xì)胞Wnt/β-catenin信號傳導(dǎo)通路中30個

4、基因發(fā)生差異性表達，其中上調(diào)13個基因，主要涉及促進β-catenin蛋白降解的基因；下調(diào) 17個基因，主要涉及Wnt信號、參與Wnt信號傳導(dǎo)及通路下游的基因。 5. 10-14M奧曲肽(對結(jié)腸癌細(xì)胞生長無抑制作用) 使結(jié)腸癌SW480細(xì)胞Wnt/β-catenin信號傳導(dǎo)通路中27個基因發(fā)生差異性表達，其中上調(diào)21個基因，主要涉及促進β-catenin蛋白降解的基因；下調(diào)6個基因，主要涉及Wnt信號、參與Wnt信號傳導(dǎo)的基因。

5、 6. 奧曲肽能呈濃度與時間依賴性下調(diào)SW480細(xì)胞中β-catenin蛋白的表達。 7. 奧曲肽能呈濃度與時間依賴性上調(diào)SW480細(xì)胞中phosph-β-catenin蛋白水平。 結(jié)論： 1. 奧曲肽能抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、誘導(dǎo)其凋亡、使其細(xì)胞周期受阻于G1期，并在一定范圍內(nèi)呈濃度與時間依賴性。 2. 首次證實奧曲肽對Wnt/β-catenin信號傳導(dǎo)通路有抑制作用。 3. 奧曲肽能下調(diào)