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文檔簡介
1、目的: 研究不同濃度生長抑素類似物奧曲肽對結腸癌細胞增殖、凋亡和細胞周期的影響;探討奧曲肽對結腸癌細胞Wnt/β-catenin信號傳導通路中相關基因及β-catenin 和phosph-β-catenin蛋白表達的作用,尋找其作用靶點,進一步闡明生長抑素抗腫瘤作用機制。 方法: 以人結腸癌細胞系SW480為實驗對象,采用MTT比色法測定不同濃度奧曲肽對SW480細胞增殖的抑制作用;采用PI標記流式細胞術分析奧曲
2、肽對SW480細胞凋亡與細胞周期的影響;利用基因芯片技術檢測不同濃度奧曲肽對結腸癌SW480細胞Wnt/β-catenin信號傳導通路中相關基因表達的影響,分析差異表達基因;應用Western-blot法分析不同濃度奧曲肽對SW480細胞中β-catenin 及phosph-β-catenin蛋白表達的影響。 結果: 1. 奧曲肽能抑制SW480細胞的增殖,并在10-12 M -10-10M(mol/L)濃度范圍內呈劑量
3、依賴性,在48小時內呈時間依賴性。奧曲肽在10-10M時抑制作用最強(P﹤0.01),10-13M以下對細胞增殖無抑制作用。 2. 奧曲肽能誘導SW480細胞凋亡,在10-12 M -10-10M范圍內呈劑量依賴性。 3.10-12 M -10-10M奧曲肽作用SW480細胞48小時后,細胞G1期逐漸增多,S期逐漸減少。 4. 10-10M奧曲肽使結腸癌SW480細胞Wnt/β-catenin信號傳導通路中30個
4、基因發(fā)生差異性表達,其中上調13個基因,主要涉及促進β-catenin蛋白降解的基因;下調 17個基因,主要涉及Wnt信號、參與Wnt信號傳導及通路下游的基因。 5. 10-14M奧曲肽(對結腸癌細胞生長無抑制作用) 使結腸癌SW480細胞Wnt/β-catenin信號傳導通路中27個基因發(fā)生差異性表達,其中上調21個基因,主要涉及促進β-catenin蛋白降解的基因;下調6個基因,主要涉及Wnt信號、參與Wnt信號傳導的基因。
5、 6. 奧曲肽能呈濃度與時間依賴性下調SW480細胞中β-catenin蛋白的表達。 7. 奧曲肽能呈濃度與時間依賴性上調SW480細胞中phosph-β-catenin蛋白水平。 結論: 1. 奧曲肽能抑制結腸癌細胞的增殖、誘導其凋亡、使其細胞周期受阻于G1期,并在一定范圍內呈濃度與時間依賴性。 2. 首次證實奧曲肽對Wnt/β-catenin信號傳導通路有抑制作用。 3. 奧曲肽能下調
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