奧曲肽對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡及GSK-3β的影響.pdf

1、目的:
　　研究不同濃度生長(zhǎng)抑素類似物奧曲肽抑制結(jié)腸癌SW480細(xì)胞生長(zhǎng)增殖作用以及誘導(dǎo)凋亡的作用；探討奧曲肽對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)通路中GSK-3β、GSK-3β(Phospho-Ser9)及GSK-3β(Phospho-Tyr216)蛋白表達(dá)水平的影響，闡述奧曲肽抗腫瘤作用機(jī)制及靶點(diǎn)，以進(jìn)一步研究分析生長(zhǎng)抑素抗腫瘤作用機(jī)制，為尋找具有開發(fā)前景的Wnt/β-catenin信號(hào)傳導(dǎo)通路候選藥物提供實(shí)驗(yàn)和理論

2、依據(jù)。
　　方法:
　　1體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞作為研究對(duì)象。
　　2奧曲肽對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的抑制作用
　　2.1 MTT比色法測(cè)定不同濃度奧曲肽抑制SW480細(xì)胞增殖作用，以效價(jià)強(qiáng)度最高者為最佳抑制濃度。
　　2.2平皿集落形成法測(cè)定奧曲肽抑制體外培養(yǎng) SW480細(xì)胞的錨定依賴性生長(zhǎng)作用。
　　3奧曲肽誘導(dǎo)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞凋亡作用
　　3.1 AO/EB染色熒光顯

3、微鏡觀察奧曲肽誘導(dǎo)SW480細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變。
　　3.2 DNA凝膠電泳證實(shí)奧曲肽誘導(dǎo)SW480細(xì)胞凋亡作用。
　　4奧曲肽對(duì)SW480細(xì)胞內(nèi)GSK-3β磷酸化水平的調(diào)節(jié)作用
　　4.1應(yīng)用Western-blot法分析不同濃度奧曲肽對(duì)SW480細(xì)胞中GSK-3β蛋白表達(dá)的影響。
　　4.2應(yīng)用Western-blot法分析奧曲肽對(duì) SW480細(xì)胞中 GSK-3β(Phospho-Tyr216)蛋白表達(dá)的影

4、響。
　　4.3應(yīng)用Western-blot法分析奧曲肽對(duì)SW480細(xì)胞中GSK-3β(Phospho-Ser9)蛋白表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:
　　1奧曲肽對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的抑制結(jié)果
　　1.1 MTT比色法測(cè)定結(jié)果顯示：不同濃度奧曲肽對(duì)SW480細(xì)胞增殖活性具有不同程度的抑制作用，10-12 M、10-10 M、10-8M、10-6M（mol/L）奧曲肽處理SW480細(xì)胞后，對(duì)生長(zhǎng)增殖的抑制率分

5、別為2.36％、15.12%、34.80%、35.16%（P<0.05），其中10-8M為最佳抑制濃度。
　　1.2平皿集落形成法的結(jié)果顯示：奧曲肽對(duì) SW480細(xì)胞錨定依賴性生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，10-10M、10-8M、10-6M奧曲肽處理SW480細(xì)胞后，集落抑制率分別為19.67％、34.43％、37.70％（P<0.05）。
　　2奧曲肽誘導(dǎo)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞凋亡結(jié)果
　　2.1 AO/EB染色熒光顯微

6、鏡觀察奧曲肽處理后，部分SW480細(xì)胞呈現(xiàn)典型凋亡細(xì)胞形態(tài)特征。10-10M，10-8M和10-6奧曲肽處理SW480細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡指數(shù)分別為21.8%±6.4%，34.9%±9.6%，41.5%±10.8%（P<0.05）。
　　2.2奧曲肽（10-8 M，10-7M，10-6 M）作用SW480細(xì)胞48小時(shí)后，瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)典型“梯形”DNA條帶。
　　3奧曲肽調(diào)節(jié)SW480細(xì)胞內(nèi)GSK-3β磷酸化水平結(jié)果

7、　　3.1奧曲肽能呈濃度依賴性上調(diào) SW480細(xì)胞中 GSK-3β蛋白的表達(dá)。10-10M,10-8M和10-6M奧曲肽作用24h后，非磷酸化GSK-3β蛋白表達(dá)分別上調(diào)了9.21±1.62％，24.93±3.49％，32.52±3.82％（P<0.05）。
　　3.2奧曲肽能呈濃度依賴性上調(diào)SW480細(xì)胞中GSK-3β(Phospho-Tyr216)蛋白的表達(dá)。10-10M,10-8M和10-6M奧曲肽作用24h后，GSK-3β

8、(Phospho-Tyr216)蛋白表達(dá)分別上調(diào)了9.23±1.02％，21.36±3.34％，102.27±7.37％（P<0.05）。
　　3.3奧曲肽能呈濃度依賴性下調(diào)SW480細(xì)胞中GSK-3β(Phospho-Ser9)蛋白的表達(dá)。10-10M,10-8M和10-6M奧曲肽作用24h后，GSK-3β(Phospho-Ser9)蛋白表達(dá)分別下調(diào)了35.12±4.72％，58.63±6.43％，67.84±7.87％（P<0

9、.05）。
　　結(jié)論:
　　1.奧曲肽具有抑制體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞生長(zhǎng)增殖作用，并在一定范圍內(nèi)呈濃度依賴性。
　　2.奧曲肽能有效誘導(dǎo)體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞凋亡，并在一定范圍內(nèi)呈濃度依賴性。
　　3.奧曲肽可上調(diào)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞中GSK-3β和GSK-3β(Phospho-Tyr216)蛋白的表達(dá)，下調(diào)GSK-3β(Phospho-Ser9)蛋白的表達(dá)，提示奧曲肽可增強(qiáng)GSK-3β的活性，從