抗癌活性肽對人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：揭示抗癌活性肽(ACBP)對人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞凋亡的影響,并進(jìn)一步探討抗癌活性肽是否通過線粒體途徑影響結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡。
　　 方法：將不同濃度的ACBP作用于體外培養(yǎng)的人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞,采用MTT比色法檢測不同濃度的抗癌活性肽(ACBP-L和ACBP-NL)對人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞生長增殖的抑制作用；利用細(xì)胞HE染色檢測細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化；使用流式細(xì)胞儀檢測抗癌活性肽(ACBP)對人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞的凋亡；

2、應(yīng)用RT-PCR檢測凋亡相關(guān)因子Bcl-2、Bax的表達(dá)。
　　 結(jié)果:①M(fèi)TT結(jié)果表明不同濃度(10μg/ml、15μg/ml、20μg/ml、25μg/ml)抗癌活性肽(ACBP-L和ACBP-NL)對人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞生長增殖具有抑制作用,并呈劑量和時間依賴性?？拱┗钚噪?ACBP-NL)作用24h、48h、72h,半數(shù)有效抑制濃度(IC50)值分別為:30.3μg/ml,25.9μg/ml,21.2μg/ml；抗癌活

3、性肽(ACBP-L)作用24h、48h、72h,IC50值分別為:24.6μg/ml,22.5μg/ml,17.6μg/ml。②細(xì)胞HE染色顯示:使用72h的IC50濃度抗癌活性肽(ACBP-L和ACBP-NL)處理細(xì)胞72h后,細(xì)胞形態(tài)出現(xiàn)明顯的凋亡特征,如染色質(zhì)濃縮、凋亡小體等。③流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn),采用72h的IC50濃度抗癌活性肽(ACBP-L和ACBP-NL)經(jīng)過72h處理后,細(xì)胞發(fā)生的凋亡率較陰性對照組升高。④使用72h的I

4、C50濃度抗癌活性肽(ACBP-L和ACBP-NL)處理細(xì)胞72h后,經(jīng)RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),凋亡相關(guān)因子Bcl-2表達(dá)下降、Bax表達(dá)增加。
　　 結(jié)論：①抗癌活性肽(ACBP-L和ACBP-NL)對人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞有顯著的生長增殖抑制作用,并具有劑量和時間依賴性；②抗癌活性肽(ACBP-L和ACBP-NL)具有誘導(dǎo)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞發(fā)生凋亡的作用,其機(jī)制與促進(jìn)Bax的活化、下調(diào)Bcl-2的表達(dá),激活細(xì)胞凋亡的線粒體