HSP90抑制劑17-AAG對(duì)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的:研究熱休克蛋白90抑制劑17-烯丙胺基-17-脫甲氧基格爾德霉素(17-AAG)對(duì)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞增殖和凋亡的影響，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探討。 方法:以不同濃度的17-AAG作用于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞，應(yīng)用MTT比色法檢測(cè)其吸光度(OD)值，計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率；用DAPI染色在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)變化；采用流式細(xì)胞儀分析各組細(xì)胞的細(xì)胞周期變化；以Annexin-FIVC和PI雙染法檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡

2、率變化；免疫組化檢測(cè)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、生存素(Survivin)蛋白表達(dá)的變化；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)細(xì)胞中VEGFmRNA和SurvivinmRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果:MTT法顯示17-AAG對(duì)結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖有抑制作用，呈時(shí)間、劑量依賴性(P<0.05)。熒光顯微鏡觀察到藥物處理組細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。流式細(xì)胞儀細(xì)胞周期分析顯示，處理組HT-29細(xì)胞呈G2/M

3、期阻滯，隨著藥物濃度的加大，處于G2/M期的細(xì)胞比例上升，G1/G0期的細(xì)胞比例下降。Annexin-FIVC和PI雙染檢測(cè)結(jié)果顯示17-AAG濃度為50、100、200nmol/L的細(xì)胞凋亡率分別為15.3％、26.5％、41.2％，與對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.05)。細(xì)胞免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，對(duì)照組細(xì)胞胞漿內(nèi)有大量棕黃色顆粒，在藥物處理組中，隨著藥物濃度的加大，表達(dá)棕黃色的顆粒減少，且染色變淺。提示經(jīng)17-AAG作用后，VEG