HSP90抑制劑17-AAG對(duì)人腎癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的體外研究.pdf

1、目的： 觀察HSP90抑制劑17-AAG在缺氧狀態(tài)下對(duì)人腎癌Caki-1細(xì)胞的增殖抑制作用和放射增敏作用，并初步探討其產(chǎn)生增殖抑制作用和放射增敏作用的機(jī)制。 方法： (1)體外培養(yǎng)人腎癌Caki-1細(xì)胞株。 (2) MTT比色法檢測(cè)在缺氧狀態(tài)下不同時(shí)間和不同濃度的17-AAG對(duì)人腎癌細(xì)胞株Caki-1細(xì)胞的增殖抑制作用。 (3)將終濃度為80nmol/L17-AAG作用于人腎癌細(xì)胞株Caki-1(

2、實(shí)驗(yàn)組)，分別在常氧和缺氧狀態(tài)下進(jìn)行培養(yǎng)。同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組。采用MTT比色法檢測(cè)三組細(xì)胞不同時(shí)間OD570值；倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡；Western blot法檢測(cè)HIF-2α蛋白表達(dá)。 (4)在缺氧狀態(tài)下將終濃度為10nmol/L17-AAG作用于人腎癌細(xì)胞株Caki-1，用不同劑量6MV-X射線照射，采用集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)17-AAG對(duì)Caki-1細(xì)胞的放射增敏效應(yīng)。 結(jié)果：

3、 (1)在缺氧狀態(tài)下，HSP90抑制劑17-AAG對(duì)人腎癌細(xì)胞株Caki-1具有增殖抑制作用，且具有時(shí)間劑量依賴性。 (2)在常氧狀態(tài)下，三組Caki-1細(xì)胞的OD570值之間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在缺氧狀態(tài)下，48h后缺氧實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)OD570值明顯低于缺氧空白組和缺氧陰性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 (3)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)常氧狀態(tài)下，三組細(xì)胞凋亡率低，三者之間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0

4、.05)，而在缺氧狀態(tài)下，實(shí)驗(yàn)組凋亡率高于缺氧空白組和缺氧陰性對(duì)照組(P<0.05)。 (4) Western blot法檢測(cè)顯示：在常氧狀態(tài)下，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞HIF-2α蛋白表達(dá)受到抑制，低于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組(P<0.05)。在缺氧狀態(tài)下，實(shí)驗(yàn)組HIF-2α蛋白表達(dá)受到抑制，低于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組(P<0.05)。缺氧陰性對(duì)照組和缺氧空白對(duì)照組的HIF-2α蛋白表達(dá)分別與常氧陰性對(duì)照組和常氧空白對(duì)照組相比較，表達(dá)明顯增強(qiáng)

5、(P<0.05)。而缺氧實(shí)驗(yàn)組HIF-2α蛋白表達(dá)與常氧實(shí)驗(yàn)組比較，差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 (5)集落形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果及存活曲線相關(guān)參數(shù)顯示出放射敏感性指標(biāo)D0、SF2、 Dq均呈現(xiàn)不同程度的下降，D0增敏比達(dá)到1.3169。 結(jié)論： 在缺氧狀態(tài)下，HSP90抑制劑17-AAG對(duì)人腎癌細(xì)胞株Caki-1具有明顯的增殖抑制作用，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。其誘導(dǎo)人腎癌細(xì)胞株Caki-1細(xì)胞凋亡的機(jī)制與其下調(diào)HIF