新型HSP90抑制劑BIIB021增強食管鱗癌細(xì)胞放射敏感性的研究.pdf

1、背景：食管癌在世界上是最常見腫瘤之一。據(jù)世界衛(wèi)生組織(World healthorganization，WHO)報道，2008年全球食管癌發(fā)病率和病死率分別居世界第八位、第六位。在中國以及其他東亞國家，超過90％為食管鱗癌(esophageal squamous cellcarcinoma，ESCC)，但在西方發(fā)達國家腺癌則比較常見。術(shù)前和術(shù)后放療在提高食管鱗癌患者的局部控制率和生存率中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。但腫瘤內(nèi)在的放射抵抗仍使食管

2、鱗癌患者存在較高的復(fù)發(fā)率和較低的5年生存率。因此，為食管鱗癌患者提供一個臨床上可靠的放射增敏劑是非常有必要的。熱休克蛋白90(Heat Shock Protein90， HSP90)作為一個分子伴侶，可以促進客戶蛋白構(gòu)象成熟和穩(wěn)定，保護它們免受降解。目前已證實的客戶蛋白有200多種，包括酪氨酸激酶，轉(zhuǎn)錄因子，結(jié)構(gòu)蛋白和激素受體等。其中EGFR，Akt，Raf-1，HER2等已被證實與放射抵抗相關(guān)，從而保護腫瘤細(xì)胞免受輻射誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。

3、并且已有實驗證實HSP90在食管鱗癌及細(xì)胞系中高表達，因此HSP90為食管鱗癌患者的臨床治療提供了一個有效的靶點。抑制HSP90可以導(dǎo)致這些放射抵抗相關(guān)蛋白的降解從而增強輻射導(dǎo)致的腫瘤殺滅效應(yīng)，提高放射治療的療效。BIIB021是一種新型的人工合成的HSP90抑制劑，目前處于Ⅰ/Ⅱ期臨床試驗階段。之前有實驗證實，HSP90抑制劑17-AAG可以顯著提高食管鱗癌細(xì)胞的放射敏感性。本研究中我們探討B(tài)IIB021作為單藥以及聯(lián)合放療在食管鱗癌

4、細(xì)胞中顯著的抗腫瘤作用及其可能的機制。
　　目的：探討B(tài)IIB021對食管鱗癌細(xì)胞系增殖以及放射敏感性的影響。
　　方法：⑴CCK-8實驗用來檢測BIIB021對Eca109和Eca9706細(xì)胞系的生長抑制情況處于對數(shù)生長期的食管鱗癌細(xì)胞Eca109和Eca9706，計數(shù)并分別接種于96孔板中，加入BIIB021(濃度梯度為:0nM，65nM，125nM，250nM，500nM，1μM，2μM)培養(yǎng)5天。用CCK-8試劑盒檢

5、測在此濃度梯度下，BIIB021對Eca109和Eca9706的生長抑制情況。細(xì)胞活力=（實驗組的OD450-空白組OD450）/（對照組OD450-空白組OD450）×100。⑵一定數(shù)目的Eca109和Eca9706接種在六孔板中，加入IC25濃度的BIIB021(Eca109:97nM; Eca9706:33nM)培養(yǎng)16h后，分別接受2Gy,4Gy,6Gy,8Gy的單次劑量照射，4h后更換培養(yǎng)基。接種后的14天計數(shù)克隆形成（大于5

6、0個細(xì)胞數(shù)為一個克?。?。⑶單純照射組照射劑量為6Gy，單純藥物組藥物濃度為1μM，藥物聯(lián)合照射組用1μMBIIB021培養(yǎng)16h后接受6Gy的單次劑量照射，均在處理24h后收集細(xì)胞，分別用凋亡和周期試劑盒檢測Eca109和Eca9706的凋亡情況和周期分布。⑷Western blotting用來檢測放射抵抗相關(guān)蛋白pEGFR，pAkt，Raf-1和凋亡相關(guān)蛋白cleaved PARP的表達情況以及pEGFR和pAkt的表達情況隨BIIB

7、021培養(yǎng)時間長短(12h，24h，48h)的變化
　　結(jié)果：①BIIB021以劑量依賴的方式抑制食管鱗癌細(xì)胞Eca109和Eca9706的生長，并且Eca9706對BIIB021更敏感。②BIIB021減弱了放射后食管鱗癌細(xì)胞Eca109和Eca9706的克隆形成能力，提高了放射敏感性。③BIIB021聯(lián)合照射組與單純BIIB021處理組及單純照射組相比，顯著增加了食管鱗癌細(xì)胞的凋亡，增強了細(xì)胞G2期阻滯，處在G2期細(xì)胞對放射更

8、加敏感。④BIIB021聯(lián)合照射組與單純BIIB021處理組及單純照射組相比顯著下調(diào)了放射抵抗相關(guān)蛋白pEGFR，pAkt，Raf-1的表達，同時BIIB021聯(lián)合照射組凋亡相關(guān)蛋白cleaved PARP的表達顯著升高。pEGFR和pAkt的表達隨BIIB021培養(yǎng)時間增加而下調(diào)。
　　結(jié)論：⑴通過上述途徑，BIIB021增強了食管鱗癌細(xì)胞對放射治療的敏感性。所有的實驗結(jié)果表明，BIIB021不論是作為單獨制劑還是聯(lián)合放療都在食