新型EGFR抑制劑抑制食管癌細(xì)胞增殖的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　食管癌(esophageal cancer，EC)是人類常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率位于全球腫瘤發(fā)病率第八位，腫瘤死亡率第六位。我國(guó)是食管癌的高發(fā)國(guó)家，每年約有15萬(wàn)人死于食管癌。食管癌的治療主要以手術(shù)切除輔以放化療為主，但治療后隨訪發(fā)現(xiàn)5年生存率并沒(méi)有顯著的提高。在食管癌的研究發(fā)現(xiàn)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控著腫瘤生長(zhǎng)、增殖、代謝、轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)移、侵襲，改變信號(hào)通路分子靶點(diǎn)活性可以抑制食管癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移。目前研究最多的是

2、EGFR/Ras/Raf/MEK/Erk通路及PI3K/PTEN/AKt/mTOR信號(hào)通路。EGFR抑制劑替尼類藥物在存在EGFR轉(zhuǎn)變肺癌、乳腺癌、結(jié)腸癌及前列腺癌的治療中都有較好的效果。我們科研組研發(fā)了這一針對(duì)EGFR新化合物，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室研究該化合物對(duì)存在點(diǎn)突變的食管癌細(xì)胞是否有效。本研究通過(guò)新型EGFR抑制劑對(duì)存在點(diǎn)突變的食管癌細(xì)胞KYSE450細(xì)胞毒性，細(xì)胞增殖、軟瓊脂集落形成能力的影響，并觀察其對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響，探討了新型

3、EGFR抑制劑對(duì)食管癌KYSE450細(xì)胞中EGFR-Akt和EGFR-ERK1/2信號(hào)通路的影響。闡明新型EGFR抑制劑對(duì)食管癌細(xì)胞增殖的影響和作用機(jī)制。
　　材料與方法:
　　1.通過(guò)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)初步篩選出新型EGFR抑制劑對(duì)KYSE450細(xì)胞80％細(xì)胞存活的藥物濃度。
　　2.利用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的新型EGFR抑制劑作用于KYSE450細(xì)胞0、24、48、72和96 h對(duì)這兩種食管癌細(xì)胞的增殖的抑制作用并與

4、吉非替尼及厄洛替尼相比較。
　　3.采用軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度新型EGFR抑制劑對(duì)食管癌KYSE450細(xì)胞克隆形成能力的影響并與吉非替尼及厄洛替尼相比較。
　　4.通過(guò)皮下接種KYSE450細(xì)胞，建立裸鼠皮下接種人食管癌細(xì)胞的動(dòng)物模型，腹腔注射不同劑量的新型EGFR抑制劑及吉非替尼，觀察新型EGFR抑制劑對(duì)裸鼠移植瘤的抑瘤率并與吉非替尼相比較。
　　5.采用Western blotting方法檢測(cè)新型EGFR抑

5、制劑處理KYSE450細(xì)胞后，EGF-Akt和EGF-ERK1/2信號(hào)通路的變化。
　　結(jié)果:
　　1.細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示25、50、100、250、500nM的新型EGFR抑制劑作用于KYSE450細(xì)胞48h，細(xì)胞存活約80％以上。
　　2.細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比25、50、100、250、500nM的新型EGFR抑制劑作用KYSE450細(xì)胞24、48、72和96h，均能夠抑制其增殖(P＜0.05)，且

6、呈現(xiàn)劑量依賴性，且與相同濃度吉非替尼、厄洛替尼相比，新型EGFR抑制劑抑制率低于此兩種藥物。
　　3.軟瓊月旨克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，新型EGFR抑制劑各濃度組對(duì)KYSE450細(xì)胞克隆數(shù)均減少并有濃度依賴性，且對(duì)食管癌細(xì)胞KYSE450的抑制有濃度差異，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，新型EGFR抑制劑高劑量組瘤體體積、瘤體重量與溶劑對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);新

7、型EGFR抑制劑低劑量組抑瘤率為36.35％;高劑量組抑瘤率為82.4％;吉非替尼組抑瘤率為70.26％。高劑量組同溶劑對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.Western blotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，新型EGFR抑制劑降低了KYSE450細(xì)胞中Akt、Erk磷酸化水平，且隨著新型EGFR抑制劑濃度的增高，Akt和Erk的磷酸化水平呈下降趨勢(shì)。
　　結(jié)論:
　　1.食管癌KYSE450細(xì)胞中存在有Akt和