異澤蘭黃素抑制食管癌細(xì)胞TE1增殖的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　食管癌變是一個(gè)多因素影響、多階段進(jìn)行的演進(jìn)過程。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展和應(yīng)用，使得人們能夠在分子水平深入了解腫瘤的發(fā)病機(jī)制。大量的研究證據(jù)顯示，細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路將為食管癌的診斷和治療提供新的靶點(diǎn)。針對(duì)食管癌發(fā)生發(fā)展過程中特定靶點(diǎn)或幾個(gè)靶點(diǎn)聯(lián)合的干預(yù)將為食管癌的治療提供新的思路。
　　異澤蘭黃素來源于艾屬植物種，它是一種有效的黃酮成分，分子結(jié)構(gòu)為5，7-二羥基-3，4，6-三甲基黃酮。已有研究表明，異澤蘭黃素

2、具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤活性和細(xì)胞保護(hù)活性，但是異澤蘭黃素發(fā)揮生物活性的機(jī)制及其對(duì)食管癌的作用尚不清楚。本研究擬通過體外培養(yǎng)細(xì)胞增殖、細(xì)胞軟瓊脂克隆形成、流式細(xì)胞技術(shù)和蛋白印跡等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，探討異澤蘭黃素通過何種機(jī)制抑制TE1的增殖，以期為食管癌變?cè)缙诨瘜W(xué)干預(yù)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　材料與方法：
　　1.通過細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度(0、3.125、6.25、12.5、25、50μM)的異澤蘭黃素對(duì)食管癌細(xì)胞TE1是否有毒性效應(yīng)。

3、
　　2.通過細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)得出不同濃度(0、2.5、5、10、20、40μM)的異澤蘭黃素在不同時(shí)間(0、24、48、72、96h)對(duì)食管癌細(xì)胞TE1的抑制作用。
　　3.通過細(xì)胞軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度(0、2.5、5、10、20、40μM)異澤蘭黃素對(duì)食管癌細(xì)胞TE1的克隆形成能力的影響。
　　4.食管癌細(xì)胞TE1經(jīng)過不同濃度的異澤蘭黃素處理24 h后，用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)異澤蘭黃素對(duì)食管癌細(xì)胞TE1細(xì)胞周期的

4、影響。
　　5.通過蛋白質(zhì)印跡法來檢測(cè)異澤蘭黃素作用于食管癌細(xì)胞TE1細(xì)胞的AKT-GSK3β和MAPK/ERK信號(hào)通路變化。
　　結(jié)果：
　　1.異澤蘭黃素對(duì)食管癌細(xì)胞TE1的毒性作用通過不同濃度的異澤蘭黃素作用于食管癌細(xì)胞TE124、48 h，測(cè)出細(xì)胞存活率OD值曲線，異澤蘭黃素作用于食管癌細(xì)胞IC50處的濃度約為40μM，依次往下形成濃度梯度:0、2.5、5、10、20、40μM做下一步的實(shí)驗(yàn)。
　　2.異

5、澤蘭黃素可以抑制食管癌細(xì)胞TE1細(xì)胞的增殖與對(duì)照組相比，異澤蘭黃素抑制食管癌細(xì)胞TE1的增殖(P＜0.05)，并呈時(shí)間和劑量依賴性。
　　3.異澤蘭黃素抑制TE1細(xì)胞軟瓊脂克隆形成與對(duì)照組相比，不同濃度的異澤蘭黃素均能減少TE1細(xì)胞的克隆數(shù)（P＜0.05），并且隨著異澤蘭黃素作用濃度的增高，TE1細(xì)胞克隆數(shù)呈下降趨勢(shì)(P＜0.05)。
　　4.異澤蘭黃素通過阻滯細(xì)胞周期G1期來抑制TE1的增殖結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，隨著異澤

6、蘭黃素作用于食管癌細(xì)胞TE1濃度的增高，G1期比例也呈現(xiàn)增高趨勢(shì)(P＜0.05)。
　　5.異澤蘭黃素抑制AKT-GSK3β和MAPK/ERK信號(hào)通路異澤蘭黃素可以降低信號(hào)通路AKT-GSK3β中AKT及其下游GSK3β的磷酸化水平，隨著異澤蘭黃素濃度的增高，AKT及其下游GSK3β的磷酸化下平依次呈下降趨勢(shì)(P＜0.05);異澤蘭黃素也可以抑制MAPK/ERK信號(hào)通路，降低該通路中磷酸化ERK水平(P＜0.05)。
　　結(jié)