shRNA抑制HSF-1表達(dá)增強(qiáng)17-aag抗結(jié)腸癌療效的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：⑴通過野生型SW1116細(xì)胞觀察HSP90拮抗劑17-aag對結(jié)腸癌細(xì)胞體外增殖，周期分布和凋亡的影響。⑵通過空載真核表達(dá)載體pGPH1/GFP/Neo-shNC和低表達(dá)HSF-1真核表達(dá)載體pGPH1/GFP/Neo-HSF-1，篩選HSF-1表達(dá)不受影響的結(jié)腸癌SW1116/HSF-1(+)細(xì)胞（以下簡稱HSF-1（+）細(xì)胞）和HSF-1穩(wěn)定低表達(dá)的結(jié)腸癌SW1116/HSF-1(-)細(xì)胞（以下簡稱HSF-1（-）細(xì)胞），觀察

2、低表達(dá)HSF-1對17-aag在結(jié)腸癌SW1116細(xì)胞體外增殖、周期分布和凋亡作用中的影響，以及低表達(dá)HSF-1對17-aag處理后結(jié)腸癌SW1116細(xì)胞內(nèi)HSF-1、HSP90、HSP70、HSP27表達(dá)情況的影響，分析細(xì)胞生物學(xué)性狀的改變是否與HSP90、HSP70、HSP27蛋白相關(guān)。
　　 方法：①野生型SW1116細(xì)胞經(jīng)不同濃度不同時間17-aag處理后，通過CCK-8檢測細(xì)胞活性、FCM檢測細(xì)胞周期分布和凋亡比例，觀

3、察HSP90拮抗劑17-aag對結(jié)腸癌細(xì)胞體外增殖，周期分布和凋亡的影響。②pGPH1/GFP/Neo-shNC和pGPH1/GFP/Neo-HSF-1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染SW1116細(xì)胞株，G418篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株（HSF-1（+）細(xì)胞和HSF-1（-）細(xì)胞），通過半定量PCR、qPCR及WB驗(yàn)證穩(wěn)轉(zhuǎn)效果。③通過CCK-8檢測細(xì)胞活性、FCM檢測細(xì)胞周期分布和凋亡比例，觀察HSF-1(+)細(xì)胞和HSF-1(-)細(xì)胞在17-aag處理前的細(xì)胞生物學(xué)性

4、質(zhì)。④通過CCK-8檢測細(xì)胞活性、FCM檢測細(xì)胞周期分布和凋亡比例觀察HSF-1(+)細(xì)胞和HSF-1(-)細(xì)胞在經(jīng)17-aag處理后細(xì)胞生物學(xué)性狀的改變以及通過WB檢測HSF-1、HSP90、HSP70、HSP27蛋白表達(dá)量的變化。
　　 結(jié)果：⑴17-aag對野生型SW1116細(xì)胞增殖具有明顯的抑制作用，可以誘導(dǎo)G2/M期周期阻滯和細(xì)胞凋亡。⑵轉(zhuǎn)染pGPH1/GFP/Neo-shNC和pGPH1/GFP/Neo-HSF-1質(zhì)

5、粒后，通過G418成功篩選出HSF-1穩(wěn)定低表達(dá)的HSF-1(-)細(xì)胞和HSF-1表達(dá)沒有受到影響的HSF-1(+)細(xì)胞，并通過半定量PCR、qPCR及WB得到證實(shí)。⑶HSF-1(+)細(xì)胞和HSF-1(-)細(xì)胞在未經(jīng)17-aag處理的情況下細(xì)胞增殖、周期分布及凋亡等生物學(xué)性質(zhì)相似，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。⑷在經(jīng)17-aag處理后，HSF-1（-）細(xì)胞的增殖速率較HSF-1（+）細(xì)胞慢(P<0.001)，凋亡比例增高(P<0.001)；周期分

6、布中，HSF-1（-）細(xì)胞G2/M期細(xì)胞比例較HSF-1（+）細(xì)胞降低。⑸HSF-1（+）細(xì)胞經(jīng)17-aag處理后，胞內(nèi)HSF-1、HSP90、HSP70、HSP27表達(dá)量顯著升高，而HSF-1（-）細(xì)胞HSPs表達(dá)量較HSF-1（+）細(xì)胞明顯偏低。
　　 結(jié)論：①在體外，17-aag可誘導(dǎo)結(jié)腸癌SW1116細(xì)胞周期阻滯和發(fā)生凋亡，從而有效抑制細(xì)胞生長和殺傷腫瘤細(xì)胞。②低表達(dá)HSF-1蛋白能提高17-aag對結(jié)腸癌SW1116細(xì)