強力霉素抑制結腸癌增殖、轉移的實驗研究.pdf

1、第一部分強力霉素抑制體外培養(yǎng)結腸癌細胞增殖、明膠酶表達的實驗研究 目的：探討強力霉素(Doxycycline，DC)抑制結腸癌LoVo細胞增殖的作用機制和對明膠酶(MMP-2、MMP-9)表達的影響。 方法：采用四氮唑藍比色還原法檢測DC對LoVo細胞增殖的影響，應用流式細胞儀AnnexinV-PI雙染法檢測LoVo細胞凋亡，同時利用流式細胞儀測定細胞線粒體跨膜電位，采用免疫組織化學法檢測細胞表達MMP-2，9。

2、 結果：(1)DC抑制LoVo細胞的增殖：5~Wml、10~Wml、20~g／mlDC作用24h后，生長抑制率分別為16．4％、37．0％、44．6％(P<0．01；P<0．01；P<0．01)，作用48h后，生長抑制率分別18．6％、39．7％、49．2％(P<0．01：P<0．01；P<0．01)，呈劑量、時間依賴性；(2)DC誘導LoVo細胞凋亡：在作用24h后，5gg／ml、10~g／ml、20~g／mlDC誘導LoVo細胞凋亡

3、比率分別為7．79±0．07％、16．05±0．25％、17．42±0．08％，與對照組1．04±0．05％相比差異有顯著意義(P<0．01；P<0．01；P<0．01)；(3)LoVo細胞線粒體跨膜電位：DC作用24h后，5pffml、10~g／ml、20gffml組細胞線粒體跨膜電位下降比率分別為6．53±0．06％、23．28±0．47％、26．08±0．39％，與對照組1．51±0．03％相比差異有顯著意義(P<0．01；P<0

4、．01；P<0．01)；(4)LoVo細胞表達MMP-2，9：DC作用24h后，LoVo細胞表達MMP-2、9量下降，并呈劑量依賴性。 結論：(1)體外實驗證實強力霉素通過線粒體通路誘導細胞凋亡，從而抑制結腸癌LoVo細胞增殖；(2)體外實驗還證實強力霉素抑制結腸癌LoVo細胞MMP-2和MMP-9的表達。 第二部分強力霉素抑制裸鼠結腸癌肝轉移的實驗研究 目的：探討強力霉素抑制裸鼠人結腸癌肝轉移療效與機制。

5、 方法：脾切除法建立裸鼠人結腸癌肝轉移動物模型，應用DC灌胃(30mg／kg．day)建立實驗組，一月后處死裸鼠，通過大體和常規(guī)病理檢測觀察各組裸鼠肝轉移情況，應用組織免疫化學法檢測肝轉移癌MMP-2、9的表達，明膠酶譜電泳法檢測肝組織MMP-2、9含量及活性。 結果：(1)大體和常規(guī)病理：本試驗已成功建立裸鼠人結腸癌肝轉移動物模型；(2)大體和常規(guī)病理：對照組裸鼠肝轉移癌數(shù)目較多或呈團塊狀，實驗組肝轉移癌散在，兩組差異有顯著

6、意義(P<0．05)；(3)組織免疫化學法：對照組肝轉移癌MMP-2、9染色呈深棕色，實驗組染色強度明顯下降，對比兩組多功能真彩病理圖像分析系統(tǒng)讀取的灰度值，差異有顯著意義(P<0．01；P<0．01)；(4)明膠酶譜法檢測兩組肝組織MMP-2、9含量：實驗組酶原型MMP-2、MMP-2、酶原型MMP-9、MMP-9含量均較對照組低，差異有顯著意義(P<0．01；P<0．01；P<0．01；P<0．01)。 結論：(1)本實驗成