mir-126抑制結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的功能及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究miR-126在體內(nèi)是否具有抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移的作用及miR-126對(duì)CXCR4及RhoA信號(hào)通路是否具有調(diào)控作用。
　　方法:1.利用慢病毒載體構(gòu)建穩(wěn)定過(guò)表達(dá)miR-126的結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT116及穩(wěn)定沉默miR-126的結(jié)腸癌細(xì)胞系SW480。
　　2.利用穩(wěn)定過(guò)表達(dá)miR-126的結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT116及穩(wěn)定沉默miR-126的結(jié)腸癌細(xì)胞系SW480進(jìn)行裸鼠皮下、尾靜脈成瘤實(shí)驗(yàn)。
　　3.

2、realtime PCR檢測(cè)穩(wěn)定過(guò)表達(dá)及沉默miR-126的結(jié)腸癌細(xì)胞系中CXCR4及RhoA信號(hào)通路重要分子的表達(dá)。
　　4.利用原位雜交技術(shù)檢測(cè)人結(jié)腸癌組織芯片癌及癌旁正常黏膜中miR-126的表達(dá)，免疫組化技術(shù)檢測(cè)人結(jié)腸癌組織芯片癌及癌旁正常黏膜中CXCR4及RhoA信號(hào)通路重要分子的表達(dá)，分析各分子的表達(dá)與結(jié)腸癌臨床病理特征之間的關(guān)系，并進(jìn)行miR-126與CXCR4及RhoA通路重要分子表達(dá)的相關(guān)性分析及生存分析。

3、>　　結(jié)果:1.miR-126在HCT116過(guò)表達(dá)實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)較對(duì)照組上調(diào)5.08倍(P＜0.05)，在SW480沉默實(shí)驗(yàn)組中的表達(dá)為其對(duì)照組的0.128倍(P＜0.05)，穩(wěn)定過(guò)表達(dá)miR-126細(xì)胞系HCT116、穩(wěn)定沉默miR-126細(xì)胞系SW480構(gòu)建成功。
　　2.裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明過(guò)表達(dá)miR-126實(shí)驗(yàn)組皮下移植瘤瘤體平均體積明顯小于其對(duì)照組瘤體體積(P＜0.05)，穩(wěn)定沉默miR-126實(shí)驗(yàn)組皮下移植瘤瘤體

4、平均體積明顯大于其對(duì)照組瘤體體積(P＜0.05)。尾靜脈成瘤組中穩(wěn)定過(guò)表達(dá)miR-126實(shí)驗(yàn)組肺部轉(zhuǎn)移灶的平均數(shù)目、面積均明顯小于其對(duì)照組(P＜0.05)，穩(wěn)定沉默miR-126實(shí)驗(yàn)組肺部轉(zhuǎn)移灶的平均數(shù)目、面積均明顯大于其對(duì)照組(P＜0.05)。
　　3.realtime PCR結(jié)果表明在穩(wěn)定過(guò)表達(dá)miR-126結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT116實(shí)驗(yàn)組中CXCR4、RhoGEF的表達(dá)較其對(duì)照組明顯下調(diào)，ARHGAP5的表達(dá)較其對(duì)照組明顯上調(diào)

5、(P＜0.05);在穩(wěn)定沉默miR-126細(xì)胞系SW480實(shí)驗(yàn)組中CXCR4、RhoGEF的表達(dá)較其對(duì)照組明顯上調(diào)，ARHGAP5的表達(dá)較其對(duì)照組明顯下調(diào)(P＜0.05)。
　　4.原位雜交結(jié)果顯示miR-126在人結(jié)腸癌組織中的表達(dá)較癌旁正常黏膜表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.05)，且miR-126的表達(dá)與結(jié)腸癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)(P＜0.05);免疫組化結(jié)果示CXCR4及RhoA信號(hào)通路重要分子RhoA、RhoGEF、Rho

6、GAP、ROCK、PI3K、PAK1、PKN1在人結(jié)腸癌組織中的表達(dá)較癌旁正常黏膜組織均明顯上調(diào)(P＜0.05)，且CXCR4、RhoA、RhoGEF、ROCK、PI3K的表達(dá)與結(jié)腸癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)(P＜0.05)，RhoGAP、PAK1、PKN1的表達(dá)與各項(xiàng)臨床病理特征均無(wú)關(guān)(P＞0.05)。相關(guān)分析結(jié)果顯示miR-126的表達(dá)與CXCR4、RhoA、RhoGEF、ROCK的表達(dá)明顯負(fù)相關(guān)(P＜0.05)，與RhoGAP

7、、PAK1、PKN1、PI3K的表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系(P＞0.05);CXCR4的表達(dá)與RhoA、RhoGEF、ROCK的表達(dá)明顯正相關(guān)(P＜0.05)，與RhoGAP、PAK1、PKN1、PI3K的表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)關(guān)系(P＞0.05)。生存分析結(jié)果顯示miR-126陽(yáng)性表達(dá)組結(jié)腸癌患者生存率明顯高于陰性表達(dá)組，CXCR4、RhoA、RhoGEF、ROCK陽(yáng)性表達(dá)組患者生存率明顯低于陰性表達(dá)組患者(P＜0.05)，RhoGAP、PAK1、P