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文檔簡介
1、研究背景和目的:
卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一,具有發(fā)展迅速、惡性程度高、極易發(fā)生局部侵襲和腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移的特點(diǎn),其復(fù)發(fā)率和致死率高居?jì)D科惡性腫瘤之首。LIMK-1的主要作用是組裝含肌動(dòng)蛋白的細(xì)胞骨架,在腫瘤細(xì)胞的增殖與侵襲中具有重要的作用。miRNA即microRNA,是一類新發(fā)現(xiàn)的內(nèi)源性小分子非編碼單鏈RNA,長約18~26個(gè)核苷酸,具體作用方式取決于靶mRNA的3'末端非翻譯區(qū)堿基互補(bǔ)配對(duì)與匹配的程度,最終致靶mR
2、NA降解或轉(zhuǎn)錄后翻譯受抑,廣泛參與動(dòng)植物生長發(fā)育、細(xì)胞分化、增殖與凋亡以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移等各種生理及病理過程。通過我們先前的研究發(fā)現(xiàn)miR-126通過調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)對(duì)腫瘤的增殖、侵襲有抑制的作用,然而作為血管內(nèi)皮生長因子的VEGF如何抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲的機(jī)制目前還不明了,為此,本研究擬構(gòu)建miR-126的慢病毒表達(dá)載體LV-miR-126,并將其轉(zhuǎn)染上皮性卵巢癌細(xì)胞株,明確miR-126對(duì)卵巢癌細(xì)胞LIMK-1的影響,從而
3、為闡明卵巢癌侵襲的機(jī)制以及為抑制卵巢癌的轉(zhuǎn)移提供一條新的途徑。
研究材料和方法
培養(yǎng)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3,通過慢病毒包裝miR-126轉(zhuǎn)染卵巢癌SKOV3細(xì)胞系,將其分為三組:轉(zhuǎn)染miR-126表達(dá)組(SKOV3/LV3-has-miR-126組)、轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照組(SKOV3/LV3NC組)和空白對(duì)照組(SKOV3組),通過Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)觀察各組細(xì)胞的侵襲能力,通過免疫熒光比較各組細(xì)胞LIMK-1表達(dá)
4、量的差別,分析miR-126與LIMK-1表達(dá)的關(guān)系。
結(jié)果:
1.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示SKOV3細(xì)胞侵過基質(zhì)膠的穿膜細(xì)胞數(shù)在SKOV3組細(xì)胞中是261±8。與SKOV3組細(xì)胞相比較,轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照組SKOV3/LV3NC細(xì)胞侵過基質(zhì)膠的穿膜細(xì)胞數(shù)沒有明顯改變(276±20,P>0.05),轉(zhuǎn)染LV3-has-miR-126組細(xì)胞侵過基質(zhì)膠的穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少(232±17,P<0.05)。
2
5、.SKOV3組與SKOV3/LV3NC組的細(xì)胞LIMK-1蛋白的表達(dá)量相近;與SKOV3組與SKOV3/LV3NC組的細(xì)胞LIMK-1蛋白的表達(dá)量相比,LV3-has-miR-126組細(xì)胞LIMK-1蛋白的表達(dá)量明顯減少。
結(jié)論:
1.miR-126轉(zhuǎn)染的SKOV3卵巢癌細(xì)胞侵過基質(zhì)膠的穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少,提示miR-126的表達(dá)可抑制卵巢癌的侵襲。
2.miR-126轉(zhuǎn)染的SKOV3卵巢癌細(xì)胞LIMK-1
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