Wip1調(diào)控漿液性卵巢癌細(xì)胞增殖以及轉(zhuǎn)移侵襲功能及其與臨床相關(guān)性初步研究.pdf

1、目的：
　　研究野生型p53誘導(dǎo)的蛋白磷酸酶1(wip1)對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖以及轉(zhuǎn)移侵襲的調(diào)控功能，并檢測(cè)wip1在漿液性卵巢癌組織中的表達(dá)水平，分析其與生存的相關(guān)性。
　　方法：
　　1.構(gòu)建wip1沉默和過(guò)表達(dá)卵巢癌細(xì)胞系，檢測(cè)其細(xì)胞內(nèi)wip1蛋白及mRNA水平變化;分析其細(xì)胞周期、克隆形成能力以及細(xì)胞增殖情況的變化;通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其對(duì)細(xì)胞轉(zhuǎn)移和侵襲能力的影響;使用免疫熒光及Western

2、blot方法檢測(cè)wip1及其相關(guān)蛋白的變化情況。
　　2.收集本院初次手術(shù)的高級(jí)別漿液性卵巢癌組織150例以及正常卵巢組織10例，使用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)wip1在高級(jí)別漿液性卵巢癌中的表達(dá)情況，同時(shí)搜集相關(guān)病理、手術(shù)及隨訪信息，統(tǒng)計(jì)分析其與預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.在wip1 shRNA卵巢癌細(xì)胞中，wip1的mRNA及蛋白水平明顯低于對(duì)照組，而在wip1 cDNA卵巢癌細(xì)胞中，Wip1的mRNA及蛋白水平明

3、顯高于對(duì)照組。wip1表達(dá)被干擾后，細(xì)胞阻滯于G1期;細(xì)胞生長(zhǎng)速度減慢、克隆數(shù)量減少。在轉(zhuǎn)移相關(guān)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，Wip1沉默后細(xì)胞的遷移和侵襲性增強(qiáng);轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白E-cadherin水平降低，而N-cadherin、vimentin、MMP9、VEGF等蛋白的表達(dá)水平有不同程度的升高，轉(zhuǎn)錄因子slug和snail表達(dá)水平也升高。
　　2.免疫組化結(jié)果顯示wip1在高級(jí)別漿液性卵巢癌組織中呈現(xiàn)不同程度的陽(yáng)性表達(dá);臨床因素相關(guān)性分析，wip