miR-124靶作用GMFβ基因調節(jié)卵巢癌細胞的侵襲和轉移.pdf

1、目的:本研究旨在探討miR-124是否通過靶向調控GMFβ基因表達而抑制卵巢癌細胞侵襲、轉移和增殖能力，從而揭示miR-124抑制腫瘤的分子機制。
　　方法:
　　1、追蹤文獻并運用生物信息學軟件Targetscan確定與卵巢癌關系密切的miR-124和靶基因GMFβ。
　　2、Realtime RT-PCR檢測miR-124和GMFβ在侵襲、非侵襲卵巢癌細胞系中表達差異。
　　3、Luciference rep

2、ort assay確證靶標作用位點。
　　4、轉染miR-124表達載體，Realtime RT-PCR和Western blot檢測GMFβ基因在mRNA和蛋白質水平變化。
　　5、過表達miR-124后，采用細胞劃痕實驗檢測細胞遷移、Transwell侵襲實驗檢測細胞侵襲、MTS測定細胞增殖。
　　結果:
　　1、GM鄧在卵巢癌中高表達，miR-124在卵巢癌中低表達，targetScan綜合預測GMFβ基因

3、與miR-124有很強的靶作用關系。
　　2、與卵巢癌細胞系CAOV3（非侵襲）比較，GMFβ基因在SKOV3（侵襲）中高表達，相反miR-124低表達。
　　3、Luciference report assay證實GMFβ-3'UTR是miR-124的靶作用位點。
　　4、過表達miR-124后GMFβ基因mRNA水平無明顯變化，蛋白質水平降低。
　　5、miRNA的功能分析:
　　①劃痕實驗:過表達mi