褪黑素抑制結腸癌RKO細胞增殖和遷移及其分子機制.pdf

1、目的：探討褪黑素(melatonin,Mel)對結腸癌RKO細胞增殖、凋亡和遷移的影響及其分子機制。
　　方法：MTT法檢測Mel對RKO細胞增殖的影響,Westernblot檢測內(nèi)質網(wǎng)應激(endoplasmicreticulum stress,ERs)相關蛋白的表達水平,檢測Mel受體MT1、MT2的表達水平。細胞劃痕實驗檢測Mel對RKO細胞遷移的影響,檢測肌球蛋白輕鏈激酶(mitogenactivatedproteinki

2、nases,MLCK)和骨橋蛋白(osteopontin,OPN)的表達水平。檢測絲裂原活化的蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinases,MAPK)信號轉導通路相關蛋白,并且加入抑制劑和激活劑研究Mel對其的作用。
　　結果：RKO細胞經(jīng)過Mel處理可以抑制其增殖,同時重鏈結合蛋白(heavychainbindingprotein,BIP)的表達水平下降、C/EBP同源蛋白(CHOP)和半胱氨酸天冬氨酸

3、蛋白酶3(cysteinylaspartatespecificproteinase3,caspase3)的表達水平上升,表明Mel可以通過內(nèi)質網(wǎng)應激途徑促進RKO細胞凋亡。Mel可以誘導RKO細胞中MT1的表達上升,對MT2無誘導作用。Mel可以抑制RKO細胞遷移,并且可以抑制MLCK和OPN的表達,RKO細胞的遷移能力與MLCK和OPN的表達下降有關。通過對MAPK通路蛋白的檢測發(fā)現(xiàn),Mel上調(diào)細胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2(extra

4、cellularsignal-regulatedproteinkinase1/2,ERK1/2)的磷酸化水平,下調(diào)p38(p38mitogenactivatedproteinkinases,p38)和C-JunN末端激酶(C-JunN-terminalkinase,JNK)的磷酸化水平,發(fā)揮抗腫瘤作用。
　　結論：Mel可以通過內(nèi)質網(wǎng)應激途徑誘導RKO細胞凋亡,抑制其增殖,并且通過下調(diào)細胞骨架相關蛋白MLCK和OPN的表達水平,抑