桔梗皂苷D抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖及其機(jī)制的研究.pdf

1、研究背景：
　　 癌癥是導(dǎo)致成年人死亡的主要疾病之一。各種環(huán)境的或遺傳的致癌因素以協(xié)同或序貫的方式引起DNA損傷，激活原癌基因或滅活抑癌基因，引起細(xì)胞凋亡抵抗或生長周期不受控制，使靶細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化是惡性腫瘤發(fā)生的主要原因。由于生活環(huán)境的改變，癌癥的發(fā)病率和死亡率逐年上升，已成為威脅人類健康的重大疾病之一。結(jié)直腸癌(Colorectal Carcinoma，CRC)是當(dāng)今最常見的惡性腫瘤之一。由于確診為結(jié)腸癌的患者多處于中晚期，

2、已無法通過手術(shù)治療徹底清除腫瘤病灶或因遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移失去手術(shù)治療的機(jī)會(huì)，化療是目前結(jié)腸癌主要的治療手段。但當(dāng)前臨床應(yīng)用的化療方案存在毒副反應(yīng)嚴(yán)重、價(jià)格昂貴、多藥耐藥等問題，因此，尋找高效低毒的抗結(jié)腸癌藥物以提高中晚期患者的生存率具有重要意義。
　　 我們在前期研究中已經(jīng)證實(shí)：桔梗皂苷D(PD)具有抑制人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞K562和肺腺癌細(xì)胞A549生長的作用。但是，PD是否具有抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的作用及其分子機(jī)理的研究尚缺乏文獻(xiàn)資

3、料。本文通過體外培養(yǎng)的人結(jié)腸癌SW480、SW620、HCT116、HT29細(xì)胞為疾病模型，研究PD抑制結(jié)腸癌細(xì)胞生長的作用效應(yīng)及分子機(jī)理，為開拓PD的臨床應(yīng)用價(jià)值提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 目的：
　　 研究PD對人結(jié)腸癌細(xì)胞生長的影響，探討其抑制細(xì)胞增殖的機(jī)制是否通過周期阻滯及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
　　 方法：
　　 體外培養(yǎng)人結(jié)腸癌SW480、SW620、HCT116、HT29細(xì)胞，MTT實(shí)驗(yàn)觀察不同濃度PD作

4、用細(xì)胞24、48h對其增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)分析PD作用24h對SW620細(xì)胞周期分布的影響，Western blot實(shí)驗(yàn)檢測PD對周期蛋白cyclinD1、CDK6和c-myc表達(dá)的影響；Annexin V-FITC/PI雙染法分析PD作用48h后的SW620細(xì)胞凋亡率，Western blot檢測凋亡蛋白caspse3、PARP的表達(dá)水平，Western blot分析PD作用SW620細(xì)胞24h對MAPK磷酸化水平的影響。
　

5、　 結(jié)果：
　　 與空白對照組相比，PD呈劑量依賴關(guān)系抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞的生長。但PD抑制SW620細(xì)胞生長的作用最為明顯，不同濃度(5、10、15、20μM)的PD作用細(xì)胞24后，存活率分別為96.2％±2.3％、87.5％±4.9％、67.2％±4.8％、52.6％±3.7％；作用細(xì)胞48h后，存活率分別為92.1％±5.4％、73.2％±4.1％、43.2％±3.2％和31.5％±2.1％。15、20μMPD作用細(xì)胞24

6、h后，G0/G1期細(xì)胞比例顯著增加，分別為72.83％±5.26％和76.82％±5.83％(p<0.05，空白對照組56.78％±4.92％)，周期蛋白cyclinD1、c-myc、CDK6表達(dá)明顯下調(diào)。10、15、20μM PD作用細(xì)胞48 h后，細(xì)胞凋亡率明顯增加，分別為19.5％±5.1％、35.8％±5.3％和43.8％±4.0％(p<0.05，空白對照組8.9％±5.7％)，凋亡蛋白pro-caspase3、PARP表達(dá)下降

7、。10、15、20μMPD作用細(xì)胞24 h后，與細(xì)胞增殖相關(guān)的ERK1/2磷酸化水平顯著下降，與細(xì)胞應(yīng)激、凋亡相關(guān)的JNK、p38磷酸化顯著升高。
　　 結(jié)論：
　　 PD具有抑制結(jié)腸癌細(xì)胞生長的作用效應(yīng)，其分子機(jī)制為通過下調(diào)周期蛋白cyclinD1、c-myc、CDK6的表達(dá)，將細(xì)胞阻滯于G1期，以及剪切激活pro-caspase3、PARP誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的生長，并與JNK、p38的激活、ERK1/2的去