葫蘆素E對人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2增殖與遷移的影響及其作用機(jī)制.pdf

1、目的：
　　葫蘆素E（cucurbitacin E, CuE）主要從中藥甜瓜蒂中提取，具有抗腫瘤、保肝、抗化學(xué)致癌及提高機(jī)體免疫力等多種生物活性。既往研究表明，CuE能夠抑制一些腫瘤細(xì)胞的增殖與遷移，但是否對人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2增殖與遷移也具有抑制作用尚不清楚，基于腫瘤細(xì)胞的增殖與遷移是癌癥發(fā)生發(fā)展過程中的重要環(huán)節(jié)，本課題旨在研究不同濃度CuE對人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2增殖與遷移的影響，并探討其分子機(jī)制，為結(jié)腸癌的治療提供新的

2、實驗依據(jù)。
　　方法：
　　以人結(jié)腸癌細(xì)胞珠Caco-2為研究對像，采用細(xì)胞、分子水平相結(jié)合的體外實驗：
　　1.以0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L的CuE分別處理Caco-2細(xì)胞，用 CCK-8試劑盒法檢測細(xì)胞的增殖能力，劃痕實驗及 Transwell小室細(xì)胞跨膜實驗檢測細(xì)胞的遷移能力；
　　2.用0.1μmol/L CuE處理Caco-2細(xì)胞24h，以DNaseI、鬼筆環(huán)肽熒光標(biāo)記法分別檢測

3、細(xì)胞G-actin與F-actin相對含量；
　　3.用0.1μmol/L CuE處理Caco-2細(xì)胞24h，采用鬼筆環(huán)肽熒光標(biāo)記細(xì)胞肌動蛋白微絲骨架 F-actin，且激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞骨架F-actin的變化；
　　4.以0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L的CuE分別處理Caco-2細(xì)胞24h，用Western blot分別檢測cofilin、p-cofilin、LIMK2及p-LIMK2蛋白表達(dá)的

4、變化。
　　結(jié)果：
　　1. CCK-8法、劃痕實驗及 Transwell跨膜實驗結(jié)果顯示：0.001μmol/L與0.01μmol/L的CuE對Caco-2細(xì)胞的增殖與遷移抑制作用較弱，0.1、1μmol/L及10μmol/L的CuE對Caco-2細(xì)胞的增殖與遷移均具有明顯的抑制作用（P<0.05），并呈現(xiàn)出劑量與時間依賴性；
　　2. DNaseI、鬼筆環(huán)肽熒光標(biāo)記法的結(jié)果表明0.1μmol/L的CuE能增加Cac

5、o-2細(xì)胞G-actin含量（P<0.05），從而引起F-actin/G-actin的動態(tài)平衡失調(diào)；
　　3.激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果顯示：0.1μmol/L的 CuE分別處理Caco-2細(xì)胞1h、2h、6h、12h及24h后，CuE對細(xì)胞骨架F-actin有明顯的逐漸破壞作用，細(xì)胞骨架微絲出現(xiàn)斷裂、聚集溶解等現(xiàn)象；
　　4. Western blot檢測結(jié)果顯示，不同濃度CuE處理Caco-2細(xì)胞24h后，cofilin、

6、p-cofilin及p-LIMK2蛋白表達(dá)明顯降低（P<0.05），而LIMK2蛋白表達(dá)與對照組比較無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　1. CuE能夠明顯抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2的增殖與遷移，抑制作用呈現(xiàn)劑量與時間依賴性；
　　2. CuE能夠引起人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2的G-actin含量增加，導(dǎo)致F-actin/G-actin的動態(tài)平衡失調(diào)；
　　3. CuE能夠破壞人結(jié)腸癌細(xì)胞Caco-2的微絲骨架F-ac