光動(dòng)力療法對(duì)結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞的殺傷作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:光動(dòng)力療法(photodynamic therapy，PDT)是19世紀(jì)末興起的并在近年發(fā)展起來的一種治療惡性腫瘤的新的輔助方法。氨三乙酸修飾卟啉(5-(4-N, N-diacetoxylphenyl)-10,15,20-tetraphenylporphyrin, DTPP)是一種新型親脂性光敏劑DTPP，腫瘤細(xì)胞比正常靜止細(xì)胞表達(dá)更多的低密度脂蛋白受體(low density lipoprotein receptor，LDLP)

2、，所以親脂性的光敏劑DTPP能夠在腫瘤細(xì)胞上高度聚集，其治療腫瘤的機(jī)理目前報(bào)道較少。關(guān)于DTPP的研究集中在細(xì)胞毒性和細(xì)胞代謝方面，本研究以DTPP為光敏劑，以結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞為模型，研究DTPP-PDT中光敏劑濃度和激光照射能量密度關(guān)系，對(duì)細(xì)胞凋亡進(jìn)行觀察，并通過相關(guān)凋亡蛋白表達(dá)的跟蹤，旨在為光動(dòng)力治療結(jié)腸癌的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法:通過MTT法分析不同濃度的光敏劑及光照劑量對(duì)人源結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞作用24h

3、后的細(xì)胞存活率;利用DAPI染色觀察細(xì)胞是否出現(xiàn)凋亡;單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)探討不同劑量DTPP-PDT時(shí)結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞DNA斷裂情況;DNA Ladder分析再次檢測(cè)DTPP-PDT引起Caco-2細(xì)胞的凋亡現(xiàn)象;Western Blotting對(duì)經(jīng)DTPP-PDT處理過的Caco-2細(xì)胞表達(dá)的增殖蛋白，即增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)進(jìn)行了評(píng)估。
　　結(jié)果:經(jīng)過光動(dòng)力對(duì)Caco-2細(xì)胞24小時(shí)的作用后，Caco-2細(xì)胞的生存率

4、出現(xiàn)了不同程度的下降;DTPP-PDT后24小時(shí)，Caco-2細(xì)胞核凋亡特征越來越明顯，而空白對(duì)照組、單純光照組和單純光敏劑組與正常培養(yǎng)的Caco-2細(xì)胞的形態(tài)學(xué)差異不明顯，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)良好。當(dāng)光敏劑DTPP濃度為10μg/mL，光照時(shí)間1分鐘和2分鐘，光照能量分別為1.2J/cm2和2.4J/cm2時(shí)，在熒光顯微鏡下觀察彗星圖像時(shí)，可見濃集閃亮的頭部和分散暗淡的尾部，且隨著光動(dòng)力作用增強(qiáng)，當(dāng)細(xì)胞損傷效應(yīng)超過其自身DNA修復(fù)時(shí)，彗星細(xì)

5、胞數(shù)目逐漸增多，慧尾逐漸拉長(zhǎng)。而空白對(duì)照組、單純光照組和單純光敏劑組Caco-2細(xì)胞則無明顯改變。用不同劑量的DTPP-PDT處理Caco-2細(xì)胞24小時(shí)后出現(xiàn)了DNA梯狀條帶。Westernblot分析表明，在DTPP10ug/ml處理Caco-2細(xì)胞，光照不同時(shí)間后，其PCNA出現(xiàn)了下調(diào)。
　　結(jié)論:當(dāng)我們選擇合適的光敏劑質(zhì)量濃度和光照能量時(shí)，DTPP-PDT可以有效的殺傷結(jié)腸癌Caco-2細(xì)胞。這種殺傷作用除了引起細(xì)胞凋亡外