光動力療法對結(jié)腸癌Caco-2細胞的殺傷作用及其機制研究.pdf

1、目的:光動力療法(photodynamic therapy，PDT)是19世紀末興起的并在近年發(fā)展起來的一種治療惡性腫瘤的新的輔助方法。氨三乙酸修飾卟啉(5-(4-N, N-diacetoxylphenyl)-10,15,20-tetraphenylporphyrin, DTPP)是一種新型親脂性光敏劑DTPP，腫瘤細胞比正常靜止細胞表達更多的低密度脂蛋白受體(low density lipoprotein receptor，LDLP)

2、，所以親脂性的光敏劑DTPP能夠在腫瘤細胞上高度聚集，其治療腫瘤的機理目前報道較少。關(guān)于DTPP的研究集中在細胞毒性和細胞代謝方面，本研究以DTPP為光敏劑，以結(jié)腸癌Caco-2細胞為模型，研究DTPP-PDT中光敏劑濃度和激光照射能量密度關(guān)系，對細胞凋亡進行觀察，并通過相關(guān)凋亡蛋白表達的跟蹤，旨在為光動力治療結(jié)腸癌的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法:通過MTT法分析不同濃度的光敏劑及光照劑量對人源結(jié)腸癌Caco-2細胞作用24h

3、后的細胞存活率;利用DAPI染色觀察細胞是否出現(xiàn)凋亡;單細胞凝膠電泳實驗探討不同劑量DTPP-PDT時結(jié)腸癌Caco-2細胞DNA斷裂情況;DNA Ladder分析再次檢測DTPP-PDT引起Caco-2細胞的凋亡現(xiàn)象;Western Blotting對經(jīng)DTPP-PDT處理過的Caco-2細胞表達的增殖蛋白，即增殖細胞核抗原(PCNA)進行了評估。
　　結(jié)果:經(jīng)過光動力對Caco-2細胞24小時的作用后，Caco-2細胞的生存率

4、出現(xiàn)了不同程度的下降;DTPP-PDT后24小時，Caco-2細胞核凋亡特征越來越明顯，而空白對照組、單純光照組和單純光敏劑組與正常培養(yǎng)的Caco-2細胞的形態(tài)學差異不明顯，細胞的生長狀態(tài)良好。當光敏劑DTPP濃度為10μg/mL，光照時間1分鐘和2分鐘，光照能量分別為1.2J/cm2和2.4J/cm2時，在熒光顯微鏡下觀察彗星圖像時，可見濃集閃亮的頭部和分散暗淡的尾部，且隨著光動力作用增強，當細胞損傷效應(yīng)超過其自身DNA修復時，彗星細

5、胞數(shù)目逐漸增多，慧尾逐漸拉長。而空白對照組、單純光照組和單純光敏劑組Caco-2細胞則無明顯改變。用不同劑量的DTPP-PDT處理Caco-2細胞24小時后出現(xiàn)了DNA梯狀條帶。Westernblot分析表明，在DTPP10ug/ml處理Caco-2細胞，光照不同時間后，其PCNA出現(xiàn)了下調(diào)。
　　結(jié)論:當我們選擇合適的光敏劑質(zhì)量濃度和光照能量時，DTPP-PDT可以有效的殺傷結(jié)腸癌Caco-2細胞。這種殺傷作用除了引起細胞凋亡外